Eventos epigenéticos no ameloblastoma: um enfoque na metilação e transcrição de metaloproteinases da matriz e perda de heterozigosidade do gene PTCH

• Autor(a) principal: Lucyana Conceic?o Farias
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-9AUHAG
• topic: Sinalização Sonic Hedgehog; MMP-2; Perda de heterozigosidade; GLI-1; GLI-2; Ameloblastoma; Metilação; PTCH; Metaloproteinase; MMP-9; Tumor odontogênico; Epigenética; Medicina molecular; Genetica molecular; Ameloblastoma/patologia; Metaloproteinases da matriz; Perda de heterozigosidade; Proliferação de células; Epigênese genética ; Patologia; Tumores odontogênicos; Metilação; Expressão gênica

O ameloblastoma é um tumor odontogênico benigno que apresenta comportamento agressivo e elevadas taxas de recorrência. Estudos foram realizados visando elucidar os mecanismos moleculares e alterações genéticas envolvidas na patogênese do tumor. Expressão aumentada de metaloproteinases da matriz (MMPs) foi identificada no ameloblastoma. Alterações na via de sinalização Hedgehog, incluindo mutações no gene PTCH, também foram associadas à patogênese de alguns tumores odontogênicos. O presente estudo teve como foco duas abordagens de pesquisa: a metilação de MMPs e a perda de heterozigosidade (LOH) no locus cromossômico do gene PTCH no ameloblastoma. Na primeira proposta de pesquisa, foram investigadas a metilação dos genes MMP-2 e MMP-9, juntamente com os níveis de transcrição de tais genes e a expressão da proteína no tumor odontogênico em questão. Para verificar o padrão de metilação, foi realizada PCR-MSP e análise de metilação baseada em sítios de restrição em 12 amostras de ameloblastoma, 12 folículos pericoronários e 12 fragmentos de gengiva saudável, incluídos como grupo controle. Além disso, foram investigados os níveis de transcrição dos genes através de PCR quantitativo em tempo real (qRT-PCR), e pela técnica de zimografia, analisou-se a expressão protéica das MMPs. Ameloblastomas e folículos pericoronários apresentaram maior frequência de MMP-2 e MMP-9 não-metilados, ao passo que as amostras de gengiva apresentaram uma acentuada prevalência das MMPs metiladas. Os folículos revelaram uma expressão aumentada significativa de mRNA MMP-2, em relação ao ameloblastoma e gengiva. No entanto, maiores níveis de expressão de MMP-9 foram identificados no ameloblastoma, comparado aos demais grupos. Todas as amostras do tumor apresentaram expressão das proteínas MMP-2 e MMP-9. Assim, a análise dos resultados sugere que a expressão de MMP-9 no ameloblastoma seja, possivelmente, associada ao perfil não-metilado do gene. Para a outra proposta de estudo, foi investigada a LOH no locus cromossômico do gene PTCH em 12 amostras de ameloblastomas. Para tal análise, foram avaliados três marcadores microssatélite (D9S252, D9S127 e D9S287) e três regiões de polimorfismos de nucleotídeos únicos (SNPs) (rs112794371, rs111446700 e rs357564), sendo todos os SNPs localizados em posição intragênica do PTCH. Além disso, os níveis de transcrição de GLI-1 e GLI-2 foram avaliados por qRT-PCR em 8 amostras de ameloblastomas e, concomitantemente, a expressão da proteína PTCH foi investigada por imuno-histoquímica. LOH na região 9q21.33-9q.31 foi verificada em 4/10 (40,0%) dos casos informativos do tumor. Todas as 8 amostras analisadas expressaram o transcrito GLI-1 e, em 7 casos, o GLI-2. A LOH no locus do gene PTCH não mostrou associação com os níveis de transcrição de GLI-1, GLI-2 ou mesmo com a expressão da proteína PTCH. Considerando todos os resultados das abordagens estudadas, os achados pontuam para uma expressão aumentada de MMP-9 no ameloblastoma, possivelmente modulada pelo perfil de metilação. Além disso, a identificação de LOH na região do PTCH sugere que tal evento pode ser relevante na patogênese do tumor, tendo como alvo outros genes supressores de tumor localizados no mesmo locus do PTCH. Estes resultados podem ser novos caminhos que necessitam ser mais explorados para o entendimento da patogênese do ameloblastoma.