Estudo molecular do tumor odontogênico queratocístico e do cisto odontogênico ortoqueratinizado

• Autor(a) principal: Marina Goncalves Diniz
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-9ESE5G
• topic: Tumor odontogênico queratocístico; Cisto odontogênico orotqueratinizado; MicroRNAs; miR-15a/16-1; BCL2; Ceratocisto odontogênico; PTCH; Cistos odontogênicos; Perda de heterozigosidade; MicroRNAs; Farmacologia; Tumores odontogênicos; Genes neoplásicos; Patologia molecular

O ceratocisto odontogênico, ou tumor odontogênico queratocístico (TOQ), e o cisto odontogênico ortoqueratinizado (COO) são tipos histológico distintos de lesões odontogênicas que, ainda que, apresentam semelhanças histológicas, apresentam também diferenças biológicas e clínicas. Mutação e perda de heterozigosidade do gene supressor de tumor Patched (PTCH) foram demonstradas no TOQ e também a alta expressão do gene anti-apoptótico linfoma de células B, 2 (BCL2) em compração ao COO e outros tumores odontogênicos. A proteína PTCH está envolvida na via Hedegehog (via HH), reprimindo a expressão de vários genes-alvo importantes para o desenvolvimento. Alterações no gene PTCH levam à ativação constitutiva da via HH, podendo, inclusive, levar à tumorigênese. O gene BCL2 codifica uma proteína capaz de parar a apoptose, facilitando a sobrevivência da célula independentemente de promover a divisão celular. Dentre os mecanismos que podem levar ao aumento da expressão do BCL2, está a perda dos microRNAs (miRNAs) miR15a e miR-16-1. Neste estudo, nós nos propusemos a investigar os aspectos moleculares das lesões TOQ e COO na tentativa de descobrir prováveis mecanismos patogênicos que explicam a semelhança histopatológica de ambos, assim como os mecanismos envolvidos na maior agressividade clínica e na maior tendência de recorrência do TOQ em relação a outras lesões odontogênicas. Para isso, nós avaliamos a perda alélica da região associada ao gene Patched 1 (PTCH), 9q22.3-31, em COO e TOQ e investigamos a expressão dos miRNAs miR-15a e miR-16-1 e seu impacto na expressão do BCL2 em TOQ. Os marcadores D9S287, D9S196 e D9S127, localizados no cromossomo 9q, foram investigados para perda alélica (PA). Houve PA de pelo menos um locus em 5/7 TOQ e em 4/7 COO. Atravéz da utilização da PCR quantitativa em tempo real (qRT-PCR), verificamos menor expressão de miR-15a e/ou miR-16-1 em 24/28 TOQ, comparadamente à folículos pericoronários. Também encontramos maior expressão do mRNA BCL2 em 19/20 TOQs comparadamente à folículos pericoronários atraves da qRT-PCR. Além disso, alta imunopositividade do Bcl-2 foi encontrada nas células da camada basal em 16/18 TOQ analisados (mediana: 42,6%). A super-expressão in vitro de miR-15a/16-1 em cultura de células primárias de TOQ resultou em uma diminuição da expressão proteíca de Bcl-2. Todos os cinco pares de TOQs coletados antes, tumor primário, e após o procedimento de marsupialização,tumor marsupializado, exibiram níveis de expressão aumentados de miR- 15a após este procedimento cirúrgico (p = 0,04). Nossas descobertas demonstram que, 15 apesar da existência de diferenças clínicas, morfológicas, imuno-histoquímicas e biológicas entre COO e TOQ, ambos carregam alterações genéticas similares no cromossomo 9q. Nossos resultados também sugerem que as células neoplásicas do TOQ apresentam um perfil anti-apoptótico no qual a baixa expressão de miR-15a/16-1 pode estar relacionado. Além disso, por fim, nós demonstramos aumento de expressão destes miRNAs após marsupialização, indicando um possivel papel etiológico e terapêutico destas pequenas moléculas de RNA no TOQ.