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Paula Prazeres MagalhaesLuiz de Macêdo FariasMireille Angela Bernardes SousaPatrícia Luciana de Oliveira2019-08-14T18:34:57Z2019-08-14T18:34:57Z2013-02-28http://hdl.handle.net/1843/BUBD-9BQFEMShigella é um dos agentes bacterianos mais relevantes de diarréia aguda. Bacteriocinas são proteínas ou peptídeos antimicrobianos sintetizados por diversas bactérias, inclusive Shigella, que, aparentemente, contribuem para a virulência do organismo. Desenvolvemos este estudo com o objetivo de caracterizar uma bacteriocina produzida por uma amostra de Shigella sonnei (SsP) isolada de fezes diarreicas. O espectro de atividade de SsP e a distribuição da característica expressão de antagonismo na população foram avaliados. Foram determinadas CIM, CBM e cinética de ação de C75 (extrato intracelular precipitado com 75% de (NH4)2SO4). A massa molecular da(s) bacteriocina(s) presentes em C75 foi estimada por SDS-PAGE/revelação in situ. C75 foi submetido a cromatografia e frações parcialmente purificadas foram submetidas a espectrometria de massa (MS). Observou-se espectro restrito de atividade, contra amostras diarreiogênicas e da microbiota intestinal. A habilidade antagonista estava distribuída homogeneamente na população. A equivalência entre CIM e CBM e o curto período necessário para eliminação da bactéria reveladora demonstraram a atividade bactericida de C75. Duas bandas ativas com massas moleculares de 57 e 66 kDa foram detectadas. Este dado, bem como a diversidade de tamanhos de halos de inibição e a presença de várias frações ativas em cada etapa de purificação, sugerem a síntese de mais de uma bacteriocina. O protocolo possibilitou a purificação parcial da(s) bacteriocina(s) presentes em C75, como demonstrado por MS. A sequência dos fragmentos proteicos gerados por tripsinólise das frações parcialmente purificadas não foi similar à de nenhuma substância antagonista depositada nos bancos de dados avaliados.Shigella is one of the most important bacterial agents of acute diarrhea.Bacteriocins are antimicrobial proteinaceous substances synthesized by a huge variety of bacteria including Shigella that seem to contribute to the virulence of the organism. We addressed the characterization of a bacteriocin produced by a Shigella sonnei isolate (SsP). The activity spectrum of SsP and the distribution of the characteristic ability to synthesize bacteriocins among SsP were evaluated. MIC and MBC of the intracellular fraction precipitated with 75% (NH4)2SO4) were also determined. Molecular mass of bacteriocin(s) found in C75 was estimated by SDS-PAGE. C75 was submitted to sequential steps of chromatography and partially purified fractions were evaluated by mass spectrometry (MS). A narrow activity spectrum against taxonomically related organisms both enteropathogens and members of the intestinal microbiota was observed. The ability to express antagonism was homogeneously distributed among SsP population. CIM and CBM values as well as the short period required to eliminate the indicator strain indicated that C75 is bactericidal. Two protein bands of 57 and 66 kDa showed activity. Taken together this result, the diversity of inhibition halos sizes, and the detection of several active fractions in every purification step suggest that SsP synthesizes more than one bacteriocin. The partial purification of the bacteriocin(s) found in C75 was achieved as demonstrated by MS. Sequences obtained did not match any bacteriocin stored in the searched databases.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGMicrobiologiaIntestinos DoençasShigella sonneiBacteriocinasProteínas PurificaçãoFatores de virulênciaSubstâncias antagonistasSubstância antagonistaFator de virulênciaPurificação de proteínaEnterite agudaShigellaBacteriocinaCaracterização de bacteriocina sintetizada por amostra de Shigella sonnei isolada de criança com diarreia agudainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALdisseta__o_patr_cia_luciana_de_oliveira_2013_completo.pdfapplication/pdf14263165https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-9BQFEM/1/disseta__o_patr_cia_luciana_de_oliveira_2013_completo.pdf0d996ff2bacd6bdb2e0351022e46e162MD51TEXTdisseta__o_patr_cia_luciana_de_oliveira_2013_completo.pdf.txtdisseta__o_patr_cia_luciana_de_oliveira_2013_completo.pdf.txtExtracted texttext/plain253996https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-9BQFEM/2/disseta__o_patr_cia_luciana_de_oliveira_2013_completo.pdf.txt1c55b0be54b2cfd5a8b6842cc448982aMD521843/BUBD-9BQFEM2019-11-14 16:02:16.58oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUBD-9BQFEMRepositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T19:02:16Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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