Estudo sobre o reparo por recombinação homóloga em diferentes linhagens de Trypanosoma cruzi

• Autor(a) principal: Bruno Marçal Repolês
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/52656
• topic: Trypanosoma cruzi; reparo de DNA; Recombinação Homóloga; DTU's; Rad51; BRCA2; radiação ionizante; Genética; Trypanosoma cruzi; Reparo do DNA; Recombinação homóloga; Radiação Ionizante; Quebras de DNA de cadeia dupla

O Trypanosoma cruzi é o agente etiológico da doença de Chagas. A variedade de sintomas da doença de Chagas pode estar relacionada com a variabilidade genética de diferentes cepas de Trypansoma cruzi. Estudos de infecção com diferentes misturas de linhagens do parasito demonstraram diferença no tropismo entre representantes de cepas distintas, demonstrando que a variabilidade genética entre populações do parasito resulta em fenótipos distintos.Apesar das incertezas quanto à posição de determinadas populações de Trypanosoma cruzi e suas relações filogenéticas, tem-se a divisão destas populações em seis linhagens taxonômicas distintas. Mesmo que relatos da ocorrência de eventos de recombinação sejam raros na literatura, sabe-se que eles ocorreram entre essas populações, gerando uma divisão entre linhagens híbridas e não-híbridas deste parasito.O metabolismo de DNA de Trypanosoma cruzi é foco de estudo de nosso grupo. Uma das vias de reparo de DNA é a via de reparo por recombinação homóloga. Esta via é responsável por lidar com quebras nas fitas dupla de DNA, geradas por agentes externos ou pelo metabolismo dos organismos.Tendo em vista este fato, estudamos a resposta à radiação ionizante (um causador de quebras de fitas dupla) em diferentes cepas representantes de linhagens distintas de Trypanosoma cruzi. Após a exposição à 500Gy de radiação ionizante,foi observado que linhagens não-híbridas apresentam um fenótipo distinto de linhagens híbridas com relação a resposta a estes danos. As linhagens não híbridas possuem uma retomada de crescimento mais rápida quando comparadas com a linhagem híbrida Cl Brener. A análise dos genes envolvidos no reparo mostrou diferenças na sequência de certas proteínas entre as cepas, e a predição do impacto destas modificações, a partir da análise de interação pelo software HADDOCK,demonstrou que a interação entre as proteínas de cada cepa pode ser distinta. A partir de PCR em tempo real, foi visto que os níveis basais de transcritos para as proteínas BRCA2 e Rad51, essenciais ao processo, são diferentes entre as cepas podendo. Demonstramos também, que a sinalização para o reparo das quebras de fita dupla é rápida e importante para o processo, já que a inibição utilizando cafeína destas vias de sinalização é capaz de atrasar a retomada de crescimento após a irradiação. Pudemos concluir que a resposta à radiação ionizante é diferente entre cada uma das cepas estudadas, assim como parece que linhagens híbridas respondem melhor à estas quebras, que pode estar relacionada com níveis distintos das proteínas Rad51 e BRCA2 entre as cepas. Concluímos também que a sinalização é importante e rápida após a exposição à radiação ionizante e igual para toda as cepas estudadas.