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Ricardo Santiago GomezDawidson Assis GomesPaula Rocha MoreiraGuilherme Machado XavierPaulo Eduardo Alencar de SouzaMarina Goncalves Diniz2019-08-13T17:23:02Z2019-08-13T17:23:02Z2012-06-13http://hdl.handle.net/1843/BUBD-9ESE5GO ceratocisto odontogênico, ou tumor odontogênico queratocístico (TOQ), e o cisto odontogênico ortoqueratinizado (COO) são tipos histológico distintos de lesões odontogênicas que, ainda que, apresentam semelhanças histológicas, apresentam também diferenças biológicas e clínicas. Mutação e perda de heterozigosidade do gene supressor de tumor Patched (PTCH) foram demonstradas no TOQ e também a alta expressão do gene anti-apoptótico linfoma de células B, 2 (BCL2) em compração ao COO e outros tumores odontogênicos. A proteína PTCH está envolvida na via Hedegehog (via HH), reprimindo a expressão de vários genes-alvo importantes para o desenvolvimento. Alterações no gene PTCH levam à ativação constitutiva da via HH, podendo, inclusive, levar à tumorigênese. O gene BCL2 codifica uma proteína capaz de parar a apoptose, facilitando a sobrevivência da célula independentemente de promover a divisão celular. Dentre os mecanismos que podem levar ao aumento da expressão do BCL2, está a perda dos microRNAs (miRNAs) miR15a e miR-16-1. Neste estudo, nós nos propusemos a investigar os aspectos moleculares das lesões TOQ e COO na tentativa de descobrir prováveis mecanismos patogênicos que explicam a semelhança histopatológica de ambos, assim como os mecanismos envolvidos na maior agressividade clínica e na maior tendência de recorrência do TOQ em relação a outras lesões odontogênicas. Para isso, nós avaliamos a perda alélica da região associada ao gene Patched 1 (PTCH), 9q22.3-31, em COO e TOQ e investigamos a expressão dos miRNAs miR-15a e miR-16-1 e seu impacto na expressão do BCL2 em TOQ. Os marcadores D9S287, D9S196 e D9S127, localizados no cromossomo 9q, foram investigados para perda alélica (PA). Houve PA de pelo menos um locus em 5/7 TOQ e em 4/7 COO. Atravéz da utilização da PCR quantitativa em tempo real (qRT-PCR), verificamos menor expressão de miR-15a e/ou miR-16-1 em 24/28 TOQ, comparadamente à folículos pericoronários. Também encontramos maior expressão do mRNA BCL2 em 19/20 TOQs comparadamente à folículos pericoronários atraves da qRT-PCR. Além disso, alta imunopositividade do Bcl-2 foi encontrada nas células da camada basal em 16/18 TOQ analisados (mediana: 42,6%). A super-expressão in vitro de miR-15a/16-1 em cultura de células primárias de TOQ resultou em uma diminuição da expressão proteíca de Bcl-2. Todos os cinco pares de TOQs coletados antes, tumor primário, e após o procedimento de marsupialização,tumor marsupializado, exibiram níveis de expressão aumentados de miR- 15a após este procedimento cirúrgico (p = 0,04). Nossas descobertas demonstram que, 15 apesar da existência de diferenças clínicas, morfológicas, imuno-histoquímicas e biológicas entre COO e TOQ, ambos carregam alterações genéticas similares no cromossomo 9q. Nossos resultados também sugerem que as células neoplásicas do TOQ apresentam um perfil anti-apoptótico no qual a baixa expressão de miR-15a/16-1 pode estar relacionado. Além disso, por fim, nós demonstramos aumento de expressão destes miRNAs após marsupialização, indicando um possivel papel etiológico e terapêutico destas pequenas moléculas de RNA no TOQ.The odontogenic keratocyst, or odontogenic keratocyst tumor (TOQ), and the odontogenic cyst orthokeratinized (COO) are distinct histologic types of odontogenic cyst presenting histological similarities, however, biological and clinical differences. Mutation and loss of heterozygosity in the tumor suppressor gene Patched 1 (PTCH) have been demonstrated in TOQ plus high expression of the anti-apoptotic gene B-cell CLL/lymphoma 2 (BCL2) compared to the COO and other odontogenic cysts. The PTCH protein is involved in the Hedgehog pathway (via HH) by suppressing the expression of several target genes important for development. The gene BCL2 encodes a protein capable of stopping apoptosis, facilitating survival of the cell independent of promoting cell division. Among the mechanisms that can lead to increased expression of BCL2 is the loss of microRNAs (miRNAs) miR15a/16-1. In this study we set out to investigate the molecular aspects of TOQ and COO in an attempt to discover probable pathogenic mechanisms that explain the histopathological similarities between TOQ and COO and clinical aggressiveness and great tendency to recurrence of the former. Therefore, we evaluated the allelic loss (PA) of the region associated with the PTCH gene, 9q22.3-31, in COO and TOQ and investigated the expression of miRNAs miR-15a and miR-16-1 and its impact on the expression of BCL2 in TOQ. The microsatellites markers D9S287, D9S196, and D9S127 were investigated for PA. There was loss in at least one locus in 5 7 TOQ and in 4 7 COO samples. By using real time PCR (qRT-PCR), we found miR-15a and/or miR-16-1 downregulation in the majority of TOQ samples (24/28). We also found higher BCL2 mRNA expression in 19 out of 20 TOQ frozen samples through qRT-PCR. Additionally, moderate to high Bcl-2 imunopositivity was found in the basal layer cells in 16 out of 18 paraffin embedded TOQ (median: 42.6%). In vitro over-expression of miR-15a/16-1 in human TOQ primary cell culture (KCOT-1) resulted in a decrease of Bcl-2 protein expression. Furthermore, all five paired TOQs collected before (primary tumor) and after the marsupialization procedure (marsupialized tumor) exhibited increased levels of miR-15a expression after this surgical procedure (p = 0.04). Our findings demonstrate that, despite the existence of clinical, morphological, immunohistochemical, and biological behavior differences between COO and TOQ, both harbor similar genetic alterations at 9q. Also, our results strongly suggest that TOQ neoplastic cells present an anti-apoptotic profile to which a lower miR-15a/16-1 expression might be related. Additionally, we demonstrated that miRNA expression 17 increases after marsupialization, implicating an etiological and therapeutic role of these small RNA molecules in TOQ.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGCistos odontogênicosPerda de heterozigosidadeMicroRNAsFarmacologiaTumores odontogênicosGenes neoplásicosPatologia molecularTumor odontogênico queratocísticoCisto odontogênico orotqueratinizadoMicroRNAsmiR-15a/16-1BCL2Ceratocisto odontogênicoPTCHEstudo molecular do tumor odontogênico queratocístico e do cisto odontogênico ortoqueratinizadoinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALmarina_gon_alves_diniz_2012_pdf.pdfapplication/pdf4493910https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-9ESE5G/1/marina_gon_alves_diniz_2012_pdf.pdf0eb22846d654c13161fe2eddaf5ad6a3MD51TEXTmarina_gon_alves_diniz_2012_pdf.pdf.txtmarina_gon_alves_diniz_2012_pdf.pdf.txtExtracted texttext/plain180656https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-9ESE5G/2/marina_gon_alves_diniz_2012_pdf.pdf.txtbbf5072bbd2606deb616c78ff5de4734MD521843/BUBD-9ESE5G2020-01-29 13:42:57.395oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUBD-9ESE5GRepositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2020-01-29T16:42:57Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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