Estudo do envolvimento da enzima Formil-Transferase, codificada pelo gene wbkC, na biossíntese do LPS da Brucella Abortus e avaliação da persistência e potência de uma cepa mutante para este gene em camundongos C57BL/6 e deficientes para IRF-1

• Autor(a) principal: Thais Lourdes Santos Lacerda
• Data de Publicação: 2006
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/UCSD-8H8KWS
• topic: mutante; Brucella abortus; cepa; LPS; Enzima formiltransferase; Bioquímica; Brucella; Brucella abortus

Brucella abortus é uma bactéria intracelular facultativa, Gram-negativa, que infecta animais domésticos e o homem, causando a brucelose. O LPS presente em sua membrana é um dos principais fatores de virulência. Esta estrutura determina a morfologia das colônias que podem ser lisas ou rugosas. Este trabalho tem como objetivo a inativação do gene wbkC, que codifica uma enzima formiltransferase envolvida na biossíntese do LPS, das linhagens selvagem e vacinal da B. abortus visando o desenvolvimento de uma nova cepa vacinal. Por recombinação homóloga dupla foram obtidos os mutantes B. abortus wbkC S2308 e B. abortus wbkC S19. A confirmação da mutação no gene wbkC foi avaliada pelas técnicas de PCR e Southern blot. As colônias destes mutantes apresentaram morfologia rugosa quando coradas com cristal violeta. Através da técnica de imunoblotting utilizando anticorpo específico para o LPS rugoso, o LPS das cepas mutantes foi reconhecido, porém com um padrão de bandas diferenciado do LPS liso das cepas parentais. Os mutantes obtidos foram avaliados em modelos animais em camundongos C57BL/6 e camundongos deficientes para o gene que codifica o fator regulador de interferon do tipo 1 (IRF-1(-/-)). As cepas mutantes da B. abortus apresentaram uma menor persistência quando comparadas com as cepas parentais B. abortus S2308 e S19, e uma virulência bastante semelhante à cepa vacinal RB51. A capacidade dos mutantes conferirem proteção ao desafio com a cepa selvagem B. abortus S2308 também foi avaliada. B. abortus wbkC S2308 induziu uma proteção em camundongos IRF-1(-/-) semelhante à observada naqueles animais vacinados com as cepas vacinais B. abortus S19 e RB51. Pode-se concluir que os mutantes da B. abortus para o gene wbkC apresentaram reduzida virulência quando comparados às linhagens selvagem e vacinais. Além disso, o mutante B. abortus wbkC S2308 induziu uma proteção em camundongos IRF(-/-) semelhante às cepas vacinais mostrando-se ser um candidato em potencial para compor uma vacina viva contra a brucelose.