Mecanismos moleculares das -toxinas da aranha Phoneutria nigriventer: papel na sinalização de cálcio em vias nociceptivas

• Autor(a) principal: Celio Jose de Castro Junior
• Data de Publicação: 2011
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8H7KYZ
• topic: Farmacologia bioquimica; Canais iônicos; Mecanismos Moleculares de Ação Farmacológica; Gânglios espinhais; Venenos de aranha; Toxinas; Dor; Sinalização do cálcio; Neurotoxinas; Medição da dor

A propagação ascendente dos sinais dolorosos envolve trocas iônicas na membrana plasmática das células nervosas em resposta ao potencial de ação. Íons cálcio penetram nos terminais sinápticos, principalmente por canais de cálcio sensíveis a voltagem, disparando a exocitose em resposta aos potenciais de ação, culminando com a comunicação neuronal e, portanto, com propagação dos sinais sensórios. A toxina Ph1, isolada do veneno da aranha P. nigriventer é potente bloqueadora de canais de cálcio sensíveis a voltagem com especificidade para canais Tipo-N, possuindo ação antinociceptiva em modelos de dor aguda e crônica em ratos. Essa e outras toxinas bloqueadoras de canais de cálcio sensíveis a voltagem obtidas do venenvo da P. nigriventer também vem sendo investigadas quanto ao seu potencial antinociceptivo, mas o mecanismos dessas toxinas sobre a sinalização de cálcio em nociceptores ainda não é conhecido. O objetivo desse trabalho foi estudar como as principais -toxinas da P.nigriventer afetam as mudanças dos níveis de Ca2+ em nociceptores em resposta a um estímulo, com foco na sinalização de cálcio mediada por canais de cálcio sensíveis a voltagem Tipo-N e no receptor vanilóide tipo-1. Estudamos também como Ph1 e Tx3-4 modulam isoformas de canais tipo-N codificadas por diferentes variantes de splicing alternativo do RNAm. Tx3-4 e Ph1 inibiram o aumento dos niveis de Ca2+, induzido por KCl, em neurônios DRGs dissociados, sendo a Tx3-4 mais eficaz dentre as -phonetoxinas testadas. Entretanto, o bloqueio da Ph1 foi mais eficaz em neurônios de menor diâmetro. Além disso, a Ph1 inibiu a elevação da [Ca2+]i induzida por capsaicina, efeito que foi mais pronunciado em DRGs submetidos a processo inflamatório prévio. Em células transfectadas com receptor vanilóide, a Ph1 exerceu bloqueio modesto mas significativo da elevação da [Ca2+]i induzida por capsaicina. A Tx3-4 exerce bloqueio mais significativo em canais tipo-N contendo o éxon 37a ao invés de 37b. Juntos, esses dados mostram que as -phonetoxinas inibem a sinalização de cálcio em nociceptores. Além disso, mostramos, pela primeira vez, que isoformas de canais iônicos contendo diferentes variantes de splicing, podem ter identidades farmacológicas distintas.