Caracterização imunoproteômica dos antígenos de Leishmania (Leishmania) infantum, L. (L.) amazonensis e L. (Viannia) braziliensisdetectados pela técnica de imuno-histoquímica

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Bruna Soares de Souza Lima
Data de Publicação: 2013
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-978K7X
Resumo: Leishmanioses são parasitoses causadas por protozoários flagelados do gênero Leishmania e encontram-se entre as principais endemias no mundo. A leishmaniose pode ser subdividida, dependendo da espécie do parasito e da resposta imune do hospedeiro, em cinco formas clínicas principais: cutânea localizada, cutânea difusa, cutânea disseminada, mucocutânea e visceral; essa última a forma mais grave, podendo ser fatal, se não tratada. Diferentes métodos de diagnóstico são usados para a confirmação da doença, dentre os quais podemos citar: parasitológico, molecular e imunológico. Apesar do diagnóstico de certeza ser o parasitológico, o diagnóstico definitivo, na maioria das vezes, resulta da associação desses diferentes métodos. Um dos métodos parasitológicos utilizados em laboratório de patologia para identificação de formas amastigotas de Leishmania em amostras tecidos de pacientes (biópsias) é a técnica de imuno-histoquímica. Tafuri et al., 2004 demostraram um método imuno-histoquímico de diagnóstico para leishmaniose visceral canina que, segundo, os autores, trata-se de uma técnica tão eficiente quanto as rotineiras, porém menos dispendiosa. Esse trabalho justifica-se pela busca de uma melhor compreensão dessa metodologia por meio da identificação das proteínas reativas, que permitem que a mesma seja usada para ambas as formas clínicas: LV e LTA. Para isso foram utilizados extratos protéicos de espécies de Leishmania fracionados em gel 2-DE seguido de western blot, utilizando o soro da técnica preconizada por Tafuri et al.,2004. Foram selecionados para identificação por EM os spots reativos em cada espécie e por todas as espécies simultaneamente. Dentre as proteínas identificadas, duas foram comuns às três espécies, hsp 70 e -tubulina, e seis foram específicas para L. amazonensis, nove para L. braziliensis e quatro para L. infantum. Algumas dessas proteínas já foram descritas na literatura em relação a sua antigenicidade, enquanto outras parecem ser antígenos novos, que poderiam ser alvos de estudos futuros, para o desenvolvimento de teste diagnóstico alternativo.
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Um dos métodos parasitológicos utilizados em laboratório de patologia para identificação de formas amastigotas de Leishmania em amostras tecidos de pacientes (biópsias) é a técnica de imuno-histoquímica. Tafuri et al., 2004 demostraram um método imuno-histoquímico de diagnóstico para leishmaniose visceral canina que, segundo, os autores, trata-se de uma técnica tão eficiente quanto as rotineiras, porém menos dispendiosa. Esse trabalho justifica-se pela busca de uma melhor compreensão dessa metodologia por meio da identificação das proteínas reativas, que permitem que a mesma seja usada para ambas as formas clínicas: LV e LTA. Para isso foram utilizados extratos protéicos de espécies de Leishmania fracionados em gel 2-DE seguido de western blot, utilizando o soro da técnica preconizada por Tafuri et al.,2004. Foram selecionados para identificação por EM os spots reativos em cada espécie e por todas as espécies simultaneamente. Dentre as proteínas identificadas, duas foram comuns às três espécies, hsp 70 e -tubulina, e seis foram específicas para L. amazonensis, nove para L. braziliensis e quatro para L. infantum. Algumas dessas proteínas já foram descritas na literatura em relação a sua antigenicidade, enquanto outras parecem ser antígenos novos, que poderiam ser alvos de estudos futuros, para o desenvolvimento de teste diagnóstico alternativo.Leishmaniasis are caused by flagellate parasites of the genus Leishmania and are among the main endemic diseases of the world. The leishmaniasis can be subdivided, depending on parasite species and host immune response into five main clinical forms: localizated cutaneous, diffuse cutaneous, disseminated cutaneous, mucocutaneous and visceral, which is the most severe form of leishmaniasis, may be fatal if left untreated. Different diagnostic methods are used for confirmation of the disease, among which we can mention: parasitological, molecular and immunological. Although the parasitological diagnosis be sure, the definitive diagnosis, in most cases, results from the combination of these different methods. One of the parasitological methods used in pathology laboratory foridentification of Leishmania amastigotes in tissue samples of patients (biopsies) is the immunohistochemistry technique. Tafuri et al., 2004 demonstrated a immunohistochemistry diagnosis for canine visceral leishmaniasis, that according to the authors this is an technique as efficient as routine, but less expensive. Therefore, this work is justified for a better understanding of this methodology by identifying reactive proteins that makes this test able to be used in both clinical forms: ATL and VL. To this, protein extracts of Leishmania species were fractionated in to 2-DE gels followed by western blot using serum on technique recommended by Tafuri et al.,2004. The reactive spots in each species and all species simultaneously , were selected to identification by MS. Among the proteins identified, two were common to the three species, hsp 70 and -tubulin, and six were specific to L. amazonensis, nine to L. braziliensis and four to L. infantum. Some of these proteins have been described in the literature because of its antigenicity, whereas others appear to be new antigens, which could be targets of future studies for developing alternative diagnostic test.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGParasitologiaLeishmaniaImunohistoquímicaProteômicaLeishmaniaImunohistoquímicaProteômicaCaracterização imunoproteômica dos antígenos de Leishmania (Leishmania) infantum, L. (L.) amazonensis e L. 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