Mapeamento dos paratopos do anticorpo monoclonal Li mAb(7) anti-proteína dermonecrótica do veneno da aranha Loxosceles intermedia

• Autor(a) principal: Patrícia Donado Vaz de Melo
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AHKP9K
• topic: Componente dermonecrótico; Neutralização; Loxosceles intermedia; Peptídeos; Li mAb(7); Mapeamento; Paratopo; Esfingomielinase D; Bioquímica e imunologia

O veneno da aranha Loxosceles intermedia contém proteínas com atividade de esfingomielinase (Smase D), principal componente dermonecrótico, responsável pelas preponderantes características do loxoscelismo cutâneo e cutâneo visceral como: a dermonecrose e insuficiência renal aguda. A partir da imunização de camundongos com o veneno bruto da aranha Loxosceles intermedia, nosso grupo obteve o anticorpo monoclonal Li mAb(7), que demonstrou ser capaz de neutralizar a atividade dermonecrótica do veneno da L. intermedia numa relação dose-dependente; 50 g de Li mAb(7) neutralizou significativamente 10 g de veneno bruto e, portanto possui alto potencial para ser utilizado na terapia antiveneno. Além disso, o Li mAb(7) não possui reatividade cruzada com venenos de Loxosceles laeta (Brasil), L. laeta (Peru) e Loxosceles gaucho. Visando a obtenção de peptídeos com elevado potencial neutralizante dos efeitos tóxicos da L. intermedia, capazes de superar dificuldades na produção de soros, como a obtenção do veneno e a reprodutibilidade inter e intraindividual da atividade neutralizante do soro, este estudo se dedicou ao mapeamento dos paratopos do Li mAb(7). Utilizando ferramentas de bioinformática e a metodologia Spot Synthesis, as regiões determinantes de complementariedade foram identificadas, peptídeos em membrana de celulose foram sintetizados a partir da análise estrutural da interação antígeno-anticorpo e os aminoácidos essenciais para o reconhecimento da proteína com atividade de esfingomielinase e suas localizações foram mapeadas. Na sequência, peptídeos solúveis foram produzidos. Por ensaio de ELISA sanduíche foi demonstrado que os peptídeos se ligam, de uma maneira específica e dose-dependente, ao mesmo epitopo conformacional reconhecido pelo Li mAb(7). No entanto, o ensaio de ELISA por competição não confirmou a disputa entre os peptídeos solúveis (607 e 642) e o anticorpo monoclonal pelo mesmo sítio de ligação. Tampouco a capacidade neutralizante da atividade de esfingomielinase foi demonstrada. Assim, demonstrou-se que os peptídeos solúveis originados do mapeamento do Li mAb(7), reconhecem especificamente o mesmo epitopo e por ferramentas de bioinformática possuem estrutura conformacional semelhante a região Fv do anticorpo.