Estudo da cardiopatia chagásica em camundongos que apresentam disfunção colinérgica

• Autor(a) principal: Aline Alves Lara Gomes
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/65755
• topic: Acetilcolina; Inflamação; Treg; Trypanosoma cruzi; Farmacologia; Acetilcolina; Inflamação; Trypanosoma cruzi

Recentemente foi descrito o papel antiinflamatório da acetilcolina (ACh). Similar ao seu papel de neurotransmissor, a ACh é um mediador do Sistema Imune, agindo negativamente em processos inflamatórios. Com intuito de avaliar o papel da ACh no processo inflamatório cardíaco, camundongos VAChT KDHOM, que apresentam aproximadamente 65% de redução na expressão do transportador vesicular de ACh (VAChT) e consequente redução na liberação de ACh, foram infectados com 50 formas tripomastigotas da cepa Colombiana de Trypanosoma cruzi. Apesar de não ter sido observada diferença significativa na parasitemia, o parasitismo cardíaco foi maior (~50%) nos camundongos VAChT KDHOM aos 35 dias pós infecção (dpi), sendo similar ao dos camundongos WT aos 40 e 55dpi. Esse aumento no parasitismo cardíaco pode se explicado, pelo menos em parte, pela redução na expressão de iNOS no coração dos camundongos VAChT KDHOM. Cortes histológicos cardíacos revelaram maior infiltrado inflamatório em corações de camundongos VAChT KDHOM aos 35 dpi quando comparado aos corações de camundongos WT. Para melhor entender o aumento do infiltrado inflamatório cardíaco foram feitas dosagens de citocinas inflamatórias no coração dos camundongos WT e VAChT KDHOM aos 20, 35, 40 e 55 dpi, os resultados foram expressos em ng/mL. Não houve diferença na produção basal de citocinas entre os camundongos WT e VAChT KDHOM controles. Os níveis de TNF-α (WT=0.625±0.16; VAChT KDHOM=2.00±0.26), IL-6 (WT=1.598±0.32; VAChT KDHOM=3.20±0.14), IL-12 (WT=2.05±0.73; VAChT KDHOM=3.69±0.37) e IFN-γ (WT=0.682±0.13; VAChT KDHOM =2.273±0.35) mantiveram-se elevados nos corações dos camundongos VAChT KDHOM aos 55dpi, enquanto que os mesmos decairam nos corações dos camundongos WT infectados. Contrariamente, os níveis de produção da IL-10 decairam após 40 dpi nos corações de camundongos VAChT KDHOM (40dpi=1.399±0.293; 55dpi=0.872±0.07). Já a produção de TGF-β, mesmo com a queda entre 40 e 55 dpi, continuou maior nos corações dos camundongos VAChT KDHOM quando comparada aos WT aos 55dpi (WT=1.61±0.37; VAChT KDHOM=5.12±0.67). A expressão de linfócitos T CD4+ e CD8+ produtores de INF-γ em baço de camundongos WT e VAChT KDHOM, controles e infectados, foi investigada através de citometria de fluxo (FACS). A expressão de células T CD4+ em baço de camundongos WT e VAChT KDHOM foi semelhante durante a infecção por T.cruzi. Porém, a infecção aumentou a expressão de linfócitos T CD8+ no baço de camundongos VAChT KDHOM aos 55 dpi quando comparado aos camundongos WT (WT=2.13; VAChT KDHOM=3.89). Após ser identificada que a expressão basal de RNAm para o gene que codifica FOXP-3 foi cinco vezes maior no coração dos camundongos VAChT KDHOM quando comparados aos WT e que esse comportamento foi observado durante a infecção, contagem de linfócitos T reg foi avaliada através de FACS nos dois genótipos. Os resultados encontrados mostraram que tanto no timo (WT=1.09 ; VAChT KDHOM=3.38) quanto no baço (WT=2.18; VAChT KDHOM=68.5) foi encontrada maior expressão de células Treg nos camundongos VAChT KDHOM aos 35 dpi. Para comprovar que a redução na liberação de ACh era o fator primordial para os fenótipos observados em camundongos VAChT KDHOM, esses camundongos foram infectados com T. cruzi e tratados durante 55 dias com piridostigmina (PIR), um inibidor de colinesterase. Os resultados de FACS mostraram que o tratamento com PIR reverteu a porcentagem de expressão de células T CD8+ produtoras de IFN-γ em baçode camundongos VAChT KDHOM para níveis semelhantes aos encontrados em camundongos WT infectados. Além disso, a expressão de linfócitos T regulatórios aumentou ainda mais no baço de camundongos VAChT KDHOM infectados e tratados com PIR, sugerindo que seja esse o mecanismo contrarregulatório dos linfócitos T produtores de IFN-γ. A avaliação da função cardíaca revelou que infecção com T. cruzi causou um remodelamento menos evidente em camundongos VAChT KDHOM do que em camundongos WT, o que pode ser devido a maior expressão de linfócitos Treg em camundongos VAChT KDHOM. Os dados obtidos indicam que a ACh regula o processo inflamatório cardíaco em infecção por T. cruzi e também sugerem um papel crucial da ACh para a contenção da inflamação no coração.