Caracterização de transcritos de ancilostomídeos envolvidos no parasitismo

• Autor(a) principal: Ana Flavia Dias Vieira da Costa
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-94MKET
• topic: Parasitologia; Parasitologia; Ancylostoma; Inibidores de proteases Kunitz; Expressão gênica; Ancilostomídeos; Parasitismo

Neste trabalho foi avaliado o perfil de transcrição e expressão diferencial de duas classes de genes envolvidos no parasitismo por ancilostomídeos: asps e inibidores de proteases tipo Kunitz, previamente identificados como sendo mais transcritos em machos de A. braziliense. A transcrição diferencial foi avaliada através da RT-PCR e RT-PCR em tempo real, para as asps 4, 5 e 6 de A. braziliense e A.caninum, asps 4 e 5 de A. ceylanicum e dois genes de inibidores deproteases tipo Kunitz para as três espécies. Em todas as espécies os genes em análise se mostraram com transcrição enriquecida nos vermes machos. Para a análise nas diferentes espécies, novos genes foram sequenciados tendo sido produzidas sete novas sequências parciais de asps e genes de inibidores de proteases tipo Kunitz para as três espécies de Ancylostoma. Como não havia sequências destes genes para adultos de N. americanus disponíveis no banco de dados, foram geradas in silico 94 sequências consenso, a partir do banco de ESTs, baseadas na similaridade com estas proteínas já descritas para A. caninum e A. ceylanicum. Domínios KU originários de sequências das quatro diferentes espécies de ancilostomídeos foram expressos e usados para a produção de anticorpos. Estes anticorpos foram utilizados para comparação da expressão diferencial de inibidoresde proteases tipo Kunitz presentes nos produtos ES e extratos protéicos totais entre machos e fêmeas das quatro espécies, por western blot. Foi observada a expressão diferencial de algumas destas proteínas entre machos e fêmeas de A. braziliense, A. caninum, A. ceylanicum e N. americanus, sendo reconhecidas 14 proteínas distintas que contêm o domínio conservado, algumas específicas dos produtos ES de N.americanus que poderão ser alvos de estudos futuros. Além disso, foi demonstrado que os domínios KU recombinantes não conferiram proteção em hamsters contra a infecção por A. ceylanicum. Entretanto, tendo em vista o potencial antigênico apresentado pelos domínios abre-se a perspectiva de que estes possam ser usados em associação com outros peptídeos para ensaios de vacinação. Por fim, os domínios KU recombinantes foram utilizados para avaliar o potencial imunogênicodas proteínas produzidas por ancilostomídeos que possuem tais domínios, através de ELISA, utilizando soros de hamsters e cães infectados ou não por ancilostomídeos. Apenas o soro de cães infectados com A. caninum foi capaz de reconhecer os domínios KU recombinantes.