Polimorfismos envolvidos no processos de resistência aos benzimidazóis em ancilostomídeos

• Autor(a) principal: Luis Fernando Viana Furtado
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/34825
• topic: Ancilostomídeos; Resistência; Benzimidazóis; β-tubulina; Parasitologia; Ancilostomídeos; Benzimidazóis; Tubulina; Polimorfismo genético

A administração em massa de benzimidazóis corresponde ao principal método de controle dos ancilostomídeos, entretanto, isso pode selecionar cepas de parasitos resistentes ao tratamento. Polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) nos códons 167, 198 e 200 do gene da β-tubulina isotipo 1 estão associados com resistência aos benzimidazóis em nematódeos. Para ancilostomídeos, a mutação no códon 167 nunca foi descrita, enquanto que as mutações nos códons 198 e 200 já foram descritas para esses helmintos, em baixa frequência na natureza. O objetivo desse trabalho foi investigar a participação de polimorfismos no gene da β-tubulina isotipo 1 no processo de resistência aos benzimidazóis em ancilostomídeos. Foi realizada uma varredura em busca dos SNPs canônicos relacionados à resistência em diferentes espécies de ancilostomídeos. Foram coletados vermes adultos de Ancylostoma braziliense e Ancylostoma caninum de cães naturalmente infectados de dois e de seis estados do Brasil, respectivamente, e ovos de Necator americanus provenientes de amostras fecais de humanos de seis estados do Brasil. Os códons 167 e 198 de A. caninum foram avaliados por ARMS-PCR e Tetraprimer ARMS-PCR, respectivamente (o códon 200 dessa espécie foi analisado em um trabalho anterior). Os códons de A. braziliense e N. americanus foram analisados por RFLP-PCR. Somente foram observadas as mutações no códon 198 de A. braziliense e N. americanus, com frequência de 1,2% e 1,4%, respectivamente, e no códon 200 de N. americanus, com frequência de 1,1%. No segundo momento, tendo em vista a baixa frequência desses SNPs na natureza e a possibilidade de existência de outros mecanismos relacionado com resistência, foi realizada a seleção de uma cepa resistente de Ancylostoma ceylanicum em hamsters, por meio de pressão seletiva de tratamento. Visto que não foram observados os SNPs canônicos no gene da β-tubulina dessa cepa, foi realizada a construção de uma minibiblioteca de cDNA do gene em questão de vermes resistentes. As análises mostraram três SNPs que não se repetiram entre as amostras. Tendo em vista que poderiam ocorrer mudanças na biologia do parasito, foi realizada uma comparação entre a cepa sensível e resistente, baseada em parâmetros parasitológicos e patogênicos. Foi observada uma menor recuperação de vermes na cepa resistente, com menor quantidade de ovos liberados nas fezes, indicando uma menor adaptação dessa cepa à infecção. Sugere-se que outros mecanismos, independentes do alvo de ligação da droga, estejam relacionados com resistência aos benzimidazóis em ancilostomídeos.