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Antonio Paulino Ribeiro SobrinhoMaria de Lourdes de A MassaraEnio Cardillo VieiraFrank Ferreira SilveiraWarley Luciano Fonseca Tavares2019-08-14T21:30:51Z2019-08-14T21:30:51Z2008-08-29http://hdl.handle.net/1843/BUOS-9K2GUGO Mulltiple Displacement Amplification (MDA) tem sido utilizado para amplificação uniforme do genoma de espécies bacterianas em diferentes amostras da cavidade oral. O MDA é particularmente útil em pequenas amostras, visto que o mesmo gera uma quantidade de amostra de DNA abundante para a análise microbiana. O objetivo do presente estudo foi avaliar a microbiota de infecções endodônticas de dentes decíduos. Um total de 35 crianças, de 4 a 10 anos de idade, apresentando dentes com raízes intactas ou menos que 2/3 de rizólise foram envolvidas no estudo. Quarenta amostras foram coletadas e amplificadas pela técnica do MDA. As amostras amplificadas foram analisadas pela hibridização DNA-DNA (Checkerboard) para taxas de 83 espécies bacterianas. Foram computadas as porcentagens de dentes colonizados por cada uma das espécies em diferentes limiares nas amostras amplificadas. Os níveis das espécies bacterianas encontradas em diferentes condições clínicas foram analisados. A significância das diferenças entre as proporções de cada espécie foram determinadas para amostras de canais radiculares de dentes com ou sem câmara pulpar exposta à cavidade oral, fístula, edema, e dor. A significância das diferenças para cada espécie nos diferentes cenários clínicos foi analisada pelo teste Kruskall-Wallis. A quantidade de DNA (± DP) nas amostras antes da amplificação era 5.2 (± 4.7) ng. Após o MDA, as amostras continham, em média, 6.05 (± 2.3) ìg de DNA. Oitenta das 83 sondas de DNA hibridizaram com uma ou mais amostras. As espécies bacterianas mais prevalentes em níveis > 104 células bacterianas foram Actinomyces naeslundii 1 e Prevotella intermedia, ambas presentes em 93.8% dos dentes analisados. O número médio de espécies (± DPM) detectadas por dente no nível de > 104 foi 20.19 (± 3.27). As espécies mais comumente encontradas neste nível foram Actinomyces naeslundii 1 e Prevotella intermédia. Quando a média de sondas de DNA x 105 (± DPM) foi analisada, as espécies mais abundantes foram A. naeslundii 1 (17.07±3.17), Prevotella nigrescens (1.12 ± 0.55) e P. intermedia (1.01 ± 0.30). Eikenella corrodens, Haemophilus aphrophilus, e Helicobacter pylori não foram detectados em nenhuma das amostras. Em relação à análise da microbiota associada a diferentes sinais e sintomas clínicos, diferenças estatisticamente significantes foram detectadas em algumas situações. Vinte e sete amostras foram estatisticamente significantes ao serem encontradas em maiores contagens em dentes abertos. A. naeslundii 1, Veillonella parvula, Gemella morbillorum. Streptococcus oralis, Aggregatibacter actinomycetemcomitans e Neisseria mucosa foram estatisticamente significantemente encontradas em maior número em dentes com exposição da câmara pulpar à cavidade oral. P. intermedia, Neisseria mucosa, Streptococcus anginosus, Selenomonas noxia e Streptococcus sanguinis foram detectados em contagens médias mais altas em dentes sem fístula. Não houve diferenças estatisticamente significantes na microbiota associada à presença ou ausência de edema. Dentes com dor apresentaram contagens elevadas de Prevotella nigrescens e Prevotella oris. A microbiota associada a canais radiculares de dentes decíduos demonstra ser mais complexa do que antes imaginado. Em conclusão, os resultados sugerem que espécies selecionadas estão associadas com os sinais e sintomas clínicos detectados em infecções endodônticas de dentes decíduos.Multiple Displacement Amplification (MDA) has been used to uniformly amplify the genome from bacterial species in different types of oral samples. MDA is particularly useful in small samples, since it generates abundant target for microbial analysis. The aim of the present study was to combine MDA and Checkerboard DNA-DNA hybridization to evaluate the microbiota of endodontic infections in deciduous teeth A total of 35 children, 4 to 10 years old, having teeth with intact roots or less than 2/3 of physiological root resorption were involved in this study. Forty root canal samples were collected.and amplified. Amplified samples were analyzed by checkerboard DNA-DNA hybridization for levels of 83 bacterial taxa. . Percentages of teeth colonized by each species at different thresholds in amplified samples were computed. Levels of bacterial species present in different clinical conditions were analyzed. Significance of differences between mean proportions of each species were determined for root canal samples taken from teeth with (open tooth) or without (closed tooth) pulp chamber exposure to oral cavity, sinus tract, swelling, and pain. Significance of differences for each species in these clinical scenarios was sought with Kruskall-Wallis test. The mean amount of DNA (± SD) in the samples prior to amplification was 5.2 (± 4.7) ng. After MDA, samples contained, on average, 6.05 (± 2.3) ìg of DNA. Eighty of 83 DNA probes hybridized with one or more samples. Most prevalent bacterial species at levels > 104 bacterial cells were Actinomyces naeslundii 1 and Prevotella intermedia, both present in 93.8%.of sampled teeth. The mean number of species (± SEM) detected per tooth at the > 104 level was 20.19 (± 3.27).The most commonly detected species at this level were Actinomyces naeslundii 1 and Prevotella intermedia When mean DNA probe counts x 105 (± SEM) were analyzed, the most abundant species were A. naeslundii 1 (17.07±3.17), Prevotella nigrescens (1.12 ± 0.55) and P. intermedia (1.01 ± 0.30). Eikenella corrodens, Haemophilus aphrophilus, and Helicobacter pylori were not detected in any of the samples. Upon the analysis of the microbiota associated with the different clinical signs and symptoms investigated, statistically significant differences could be detected in a few of them. Twenty seven species were statistically significantly increased in the open tooth group. A. naeslundii 1, Veillonella parvula, Gemella morbillorum. Streptococcus oralis, Aggregatibacter actinomycetemcomitans and Neisseria mucosa were statistically significant increased in teeth with pulp chamber exposure to oral cavity. P. intermedia, Neisseria. mucosa, Streptococcus anginosus, Selenomonas noxia and Streptococcus sanguinis were detected in higher mean counts in teeth without sinus tract. There were no statistically significant differences in the microbiota associated with presence or absence of swelling. Painful teeth presented increased counts of Prevotella nigrescens and Prevotella oris. The microbiota associated with root canals from deciduous teeth seems to be more complex than previously anticipated In conclusion, results suggest that selected species are associated with the clinical signs and symptoms detected in primary root canal infections.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGCanal radicular TratamentoBactérias IdentificaçãoCavidade pulpar/microbiologiaDentes decíduosEndodontia MicrobiologiaBactériasDentes decíduos(checkerboard)Infecção endodônticaMultiple Displacement Amplification (MDA)Hibridização DNA-DNAEstudo das comunidades microbianas associadas às infecções endodônticas de dentes decíduos sintomáticos e assintomáticos pelas técnicas do Multiple-Displacement Amplification e Checkerboard DNA-DNA Hybridizationinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALmestrado_warley_completo.pdfapplication/pdf1270975https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUOS-9K2GUG/1/mestrado_warley_completo.pdfb2589fa15789bce4b87d5dc7b17cc22eMD51TEXTmestrado_warley_completo.pdf.txtmestrado_warley_completo.pdf.txtExtracted texttext/plain76130https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUOS-9K2GUG/2/mestrado_warley_completo.pdf.txtb81093a114b9db62ba937afb4f4ec9c0MD521843/BUOS-9K2GUG2019-11-14 16:10:47.466oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUOS-9K2GUGRepositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T19:10:47Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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