Achados patológicos e aspectos moleculares do vírus da laringotraqueíte infecciosa em um surto em galinhas no sul de Minas Gerais

• Autor(a) principal: Ingred Sales Preis
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-9ABHR3
• topic: Imuno-histoquímica; Galinhas de postura; Histopatologia; Laringotraqueíte infecciosa; PCR; Herpesvirus; Galinha Doenças

A laringotraqueíte infecciosa (LTI) é uma doença do aparelho respiratório de galinhas que possui distribuição mundial sendo responsável por grandes perdas econômicas. Em novembro de 2010, o Instituto Mineiro de Agropecuária (IMA) notificou pela primeira vez ao MAPA (Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento) uma suspeita da doença no sul do Estado de Minas Gerais que posteriormente foi confirmada nos municípios Itanhandu, Pouso Alto, Passa Quatro, Itamonte e Pedralva, pertencentes às Terras Altas da Mantiqueira. Alguns dados epidemiológicos foram coletados e realizadas necropsias de aves com sinais clínicos respiratórios e coletadas amostras de laringe, traqueia, pulmão, conjuntiva, conchas e seios nasais, gânglio trigêmio e encéfalo de 78 galinhas de granjas de postura comercial da região onde ocorreu o surto. Amostras dos mesmos tecidos de 12 galinhas de subsistência e suabes laringotraqueais de outras 21 galinhas dessa região também foram coletadas. Além disso, foram coletadas amostras de tecidos de 18 galinhas de outras regiões do Estado de Minas Gerais. A imuno-histoquímica foi realizada em tecidos de 30 das 78 aves de postura comercial utilizando um anticorpo monoclonal específico para a glicoproteína gJ do envelope viral. Para a extração de DNA, foram utilizados tecidos fixados em formol e embebidos em parafina das 78 galinhas de postura comercial, de 8/12 galinhas de subsistência, 10/18 galinhas de outras regiões do Estado de MG e também das amostras de suabes laringo-traqueais. A reação em cadeia pela polimerase (PCR) foi realizada utilizando primers que amplificam um produto de 237 pares de base correspondentes a uma região diplóide invertida do gene ICP4. Duas amostras fixadas e duas de suabe foram encaminhadas para sequenciamento e alinhadas a outras cepas depositadas no GenBank. Os sinais clínicos caracterizaram-se por dificuldade respiratória, tosse, espirros, secreção nasal, por vezes sanguinolenta, apatia e em algumas aves, aumento de volume dos seios paranasais e da conjuntiva. A mortalidade observada variou de 1% a 6% entre as diferentes granjas. À necropsia, algumas aves apresentaram laringite e traqueíte fibrinosa aguda difusa moderada; outras apresentaram laringite e traqueíte fibrino-necrótica (diftérica) aguda moderada além de formação e acúmulo de material necrótico amarelado obstruindo a laringe. Foram observadas também lesões fibrinonecróticas nos seios nasais e conjuntiva. Na histopatologia, observou-se lesão caracteristica de LTI em 25/78 (32%) laringes e traqueias, caracterizadas por hiperplasia e descamação do epitélio e fusão de células epiteliais formando sincícios contendo corpúsculo de inclusão intranuclear. Em 15/78 (19%) aves observaram-se células sinciciais com corpúsculo de inclusão intranuclear nos seios paranasais e, na conjuntiva de 24/78 (30%) aves, essas células também foram observadas. Nos pulmões, observou-se lesão característica de LTI em 21/78 (26%) aves. Na imuno-histoquímica, detectou-se marcação positiva no citoplasma de sincícios com corpúsculo de inclusão e também em algumas células aparentemente normais nos quatro tecidos testados- laringe/traqueia, conjuntiva, pulmão e seios paranasais. Observou-se maior sensibilidade da PCR no diagnóstico de LTI quando comparado à histopatologia. As estirpes enviadas para sequenciamento tiveram 100% de identidade com uma estirpe dos Estados Unidos (EU104910.1); 99% com uma da Austrália (JN596963.1) e 91% com estirpes vacinais CEO (JN580316.1) e TCO (JN580315.1). O tecido onde se observou maior incidência de lesões características de LTI foi a laringe/traqueia; porém, além de lesões na traqueia, observou-se também em várias aves lesões nos pulmões, seguidos pelos seios nasais e conjuntiva. A validação da PCR em material fixado em formol e embebido em parafina oferece a vantagem de permitir o teste em tecidos fixados por formol, que viabiliza estudos retrospectivos e alternativa de conservação onde não há congelamento adequado. O alinhamento da sequencia LTI BRASIL/2011/UFMG (KC182579) mostrou algumas diferenças em nível de nucleotídeos que determinaram também diferenças em nível de aminoácidos (mutações) quando comparada às sequencias das estirpes vacinais TCO e CEO. Porém, sequenciamentos futuros de regiões maiores do gene ICP4 devem ser feitos para determinar se há correlação entre a estirpe envolvida no surto de LTI no sul de MG e outras estirpes selvagens e vacinais.