| spelling |
Eliane Goncalves de MeloRubens Antonio CarneiroMilene Alvarenga RachidAlexandre MazzantiMilene Alvarenga RachidGeraldo Eleno Silveira AlvesAna Carolina MortariBruno Benetti Junta Torres2019-08-12T08:57:55Z2019-08-12T08:57:55Z2014-02-28http://hdl.handle.net/1843/SMOC-9J2NYGObjetivou-se avaliar o efeito do dantrolene (DAN) e das células-tronco mesenquimais (CTM) no trauma medular agudo (TMA). Foram utilizados 60 ratos Wistar, machos com três meses de idade, divididos nos grupos CTM, DAN + CTM, DAN, controle positivo (CP) (trauma e placebo) e controle negativo (CN) (sem trauma e placebo). Realizou-se laminectomia de T12 em todos os grupos, seguida de TMA contusivo compressivo, com exceção do grupo CN. Uma hora depois, os grupos DAN + CTM e DAN receberam 10mg/kg de DAN em dose única, por via intraperitoneal e, após sete dias, os grupos CTM e DAN + CTM receberam 1x106 células, por via intravenosa. Testes comportamentais foram realizados para avaliar a recuperação funcional, por meio da escala de BBB e pelo método de escala descritiva adaptada, durante 30 dias. Para avaliação da medula espinhal foram realizadas histologia em H.E., imunoistoquímica com anti-NeuN e RT-PCR em tempo real para avaliar a expressão gênica dos fatores neurotróficos (BDNF e NT-3) e das proteínas antiapoptóticas (Bcl-2 e Bcl-xl) e pró-apoptóticas (caspase-3, caspase-9 e Bax), nos segmentos craniais e caudais ao epicentro da lesão. Os animais traumatizados apresentaram paraplegia grave e retenção urinária com cistite hemorrágica. Houve recuperação funcional significativa nos grupos tratados com CTM, DAN ou associação (p<0,05) em comparação ao grupo CP. Histologicamente, observou-se lesão espinhal grave, caracterizada por degeneração axonal e perda neuronal, estendendo-se craniocaudalmente ao epicentro. Todos os grupos apresentaram maior número médio de neurônios NeuN-positivos que os do CP (p<0,05). O TMA resultou em diminuição da expressão de BDNF, NT-3 e Bcl-xl, e aumento da expressão de caspase-3 e Bax em relação às medulas espinhais de animais do CN. Após o tratamento, observou-se aumento significativo da expressão de BDNF nos grupos CTM, CTM + DAN e DAN em relação ao grupo CP (p<0,05). Já a expressão da NT-3, mostrou-se maior nos grupos CTM + DAN e DAN nos segmentos craniais (p<0,05), e DAN nos caudais (p<0,01). A expressão de Bax foi significativamente menor nos grupos CTM + DAN (p<0,05) e DAN (p<0,001). A expressão das caspases 3 e 9 foi significativamente menor nos grupos DAN, CTM e CTM + DAN (p<0,05). Conclui-se que o DAN, as CTM ou associação de ambos, para tratamento de TMA em ratos, são protocolos seguros, promovem recuperação funcional e efeitos neuroprotetores, neurotróficos e antiapoptóticos..This study aimed to evaluate the effects of dantrolene (DAN) and mesenchymal stem cells (MSCs) in acute spinal cord injury (SCI). Sixty three-months-old male Wistar rats were divided into groups MSCs, MSCs + DAN, DAN, positive control (PC) (trauma and placebo) and negative control (NC) (no trauma and placebo). Laminectomy was performed at T12 level in all animals, followed by a weight-drop model of SCI, except for the NC group. An hour later, the MSCs + DAN and DAN groups received 10mg/kg of DAN in a single dose, intraperitoneally, and after seven days, the MSCs and MSCs + DAN groups received 1x106 cells intravenously. Functional recovery was assessed through BBB and adapted descriptive scale methods for 30 days. Spinal cord was evaluated with H.E., immunoistochemistry with anti-NeuN, and real time RTPCR to assess gene expression of neurotrophic factors (BDNF and NT-3), antiapoptotic (Bcl-2 and Bcl-xl) and pro-apoptotic proteins (caspase-3, caspase-9 and Bax), in the cranial and caudal segments from the lesion epicenter. Traumatized animals showed severe paraplegia and urinary retention with hemorrhagic cystitis. There was a significant recovery in groups MSCs, DAN and MSCs + DAN (p<0.05) compared to PC. Histologically, there was no systemic changes. It was observed severe spinal injury, characterized by axonal degeneration and neuronal loss, which extended cranio-caudally from epicenter. All groups showed average number of NeuN-positive neurons significantly higher when compared to PC (p<0.05). The SCI resulted in reduced BDNF, NT-3 and Bcl-xl gene expression, and increased Bax and caspase-3 expression. After treatments, there was a significant increase in BDNF expression in MSCs, MSCs + DAN and DAN groups compared to PC group (p<0.05). The NT-3 expression was higher in MSCs + DAN and DAN groups in cranial segments (p<0.05), and DAN group in the caudal ones (p<0.01). The Bax expression was significantly lower in the MSCs + DAN (p<0.05) and DAN (p<0.001). The caspase-3 and 9 expression were significantly lower in DAN, MSCs and MSCs + DAN groups (p<0.05). It was concluded that DAN, MSCs or the combination of both for the treatment of SCI in rats promote functional recovery and neuroprotection through neurotrophic and antiapoptotic effects.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGRato como animal de laboratórioMedicamentos AdministraçãoTraumatismos da medula espinhalNeuNCélulas-tronco mesenquimaisNeurotrofinasRT-PCR em tempo realDantroleneRatoApoptoseTrauma medular agudoDantrolene e células-tronco mensenquimais no tratamento do trauma medular agudo em ratos Wistarinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALtese_final.pdfapplication/pdf2028793https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/SMOC-9J2NYG/1/tese_final.pdf1a520727c0db3da67305e4a459fffdcbMD51TEXTtese_final.pdf.txttese_final.pdf.txtExtracted texttext/plain0https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/SMOC-9J2NYG/2/tese_final.pdf.txtd41d8cd98f00b204e9800998ecf8427eMD521843/SMOC-9J2NYG2019-11-14 15:29:09.473oai:repositorio.ufmg.br:1843/SMOC-9J2NYGRepositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T18:29:09Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
|