Papel do receptor ativado por pretease (PAR)2 e de proteases endógenas ativadoras de PAR2 no recrutamento de neutrófilos induzido por 1ps em pulmão de camundongos c57BL/6

• Autor(a) principal: Aline Dias de Almeida
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/30565
• topic: PAR2; Proteases; Triptase; Recrutamento de neutrófilos; Inflamação pulmonar

A imunidade inata é a primeira linha de defesa contra patógenos estimulada pelo reconhecimento de estruturas moleculares características de microorganismos tais como o lipopolissacarídeo (LPS). Os receptores ativados por protease (PARs) fazem parte de uma família de receptores metabotrópicos ativados por serino proteases através da clivagem proteolítica em sua porção N-terminal, denominados PAR1-4. Dentre esses, PAR2 é expresso tanto em leucócitos quanto em células residentes dos pulmões e, sua ativação tem sido relacionada com o desenvolvimento da inflamação e recrutamento celular, porém, ainda não está bem esclarecido o envolvimento da ativação de PAR2 por seus agonistas endógenos na resposta inflamatória induzida pelo LPS. O objetivo desse trabalho foi então avaliar o papel de PAR2 e das proteases endógenas no recrutamento de neutrófilos para o pulmão de camundongos C57BL/6 em resposta à instilação intranasal (i.n.) de LPS. Os protocolos experimentais foram aprovados pelo comitê de ética animal (CEUA/UFMG, 150/2017). Os resultados mostram que a administração i.n. de LPS ou triptase induziram o aumento do número de neutrófilos recuperados no lavado broncoalveolar (BAL) após um período de 4h, e que o pré-tratamento com injeção intraperitoneal (i.p.) do antagonista de PAR2 (ENMD-1068) ou com instilação i.n. do inibidor de proteases (aprotinina) 1h antes do estímulo com LPS reduziram a presença dessas células no BAL. Em contrapartida, o prétratamento com ENMD-1068 também aumentou o número de neutrófilos no sangue periférico dos animais. O antagonista de PAR2 diminuiu os níveis da quimiocina CXCL1 mensurada no sobrenadante do BAL obtido no intervalo de 4h após o tratamento i.n. com LPS. Além disso, a análise histopatológica em pulmões de camundongos corados com hematoxilina-eosina demonstrou que o ENMD-1068 reduziu a inflamação pulmonar induzida pelo LPS. Ademais, a expressão de PAR2 estava aumentada nos pulmões de camundongos 4h após a administração i.n. de LPS em comparação ao grupo controle. A depleção de mastócitos provocada pelo pré-tratamento com o composto 48/80 reduziu o número de neutrófilos no BAL dos animais tratados pela via i.n. com LPS. A amplitude dos sinais de cálcio e o número de células responsivas ao LPS foram reduzidos em células RAW 264.7 pré-incubadas com ENMD-1068 durante 40 min. antes do estímulo com LPS ou que foram tratadas com LPS na presença do coquetel de inibidores de proteases. Em conclusão, nossos resultados sugerem um papel de PAR2 e da triptase de mastócitos no recrutamento de neutrófilos para os pulmões de camundongos induzido por LPS.