Desenvolvimento e padronização de um ensaio in vitro para determinação da potência neutralizante de antivenenos antibotrópicos

• Autor(a) principal: Letícia Lopes de Souza
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/51156
• topic: Bothrops; ensaios in vitro; viabilidade celular; antivenenos antibotrópicos; potência neutralizante; Bioquímica e imunologia; Bothrops; Antivenenos; Sobrevivência celular

Acidentes com animais peçonhentos representam um importante problema de saúde pública em países tropicais. No Brasil, o gênero Bothrops causa mais de 70 % dos acidentes ofídicos. A imunoterapia é o único tratamento específico e recomendado pela Organização Mundial de Saúde e a produção dos antivenenos requer testes de controle de qualidade para determinação da potência neutralizante. O método convencional para essa análise é o ensaio de neutralização da letalidade, realizado em animais. Tendo isso em vista, o objetivo do trabalho foi desenvolver um método alternativo in vitro para avaliação da eficácia pré-clínica de antivenenos. O ensaio de viabilidade celular foi padronizado utilizando diferentes quantidades de soros antibotrópicos, os quais tiveram a potência estabelecida previamente in vivo. Os soros foram pré- incubados com o veneno de B. jararaca para avaliação de sua eficácia em proteger as células dos efeitos do veneno. Corroborando os resultados in vivo, os soros de alta potência foram mais eficazes em neutralizar a citotoxicidade do que os soros de baixa potência. Considerando a concentração inibitória dos soros que neutraliza 50 % da citotoxicidade (IC50), um ponto de corte foi estabelecido, a fim de diferenciar os antivenenos de acordo com suas potências. O ensaio de viabilidade celular foi adequado para análise da eficácia dos soros, o que demonstra que o método in vitro é apropriado para a determinação da potência neutralizante de antivenenos durante sua produção. Essa metodologia também foi utilizada para avaliar a eficácia do soro em neutralizar os efeitos locais do envenenamento, simulando as reais condições do tratamento. Venenos de serpentes do gênero Bothrops foram adicionados às células e após diferentes tempos o antiveneno foi administrado. A eficácia neutralizante do soro apresenta variações interespecíficas e é tempo-dependente. Em suma, o trabalho fornece dados que reforçam a possibilidade de reduzir o número de animais utilizados no estudo da eficácia dos antivenenos, seguindo a tendência mundial de substituição da experimentação animal.