Avaliação de matriz óssea humana mineralizada e desmineralizada como Scaffold para bioengenharia tecidual óssea

• Autor(a) principal: Bruno Machado Bertassoli
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/65660
• topic: Banco de osso humano; Bioengenharia tecidual óssea; Células-tronco da polpa dentária; Scaffods; Matriz óssea desmineralizada; Matriz óssea mineralizada; Biologia Celular; Bioengenharia; Células-Tronco; Matriz Óssea

A busca por soluções para perdas ou lesões do tecido ósseo tem estimulado pesquisas que visam a melhoria, a evolução e o desenvolvimento de novos biomateriais de enxertia óssea. Atualmente, enxertos alógenos representam uma alternativa importante, já utilizada em procedimentos clínicos em ortopedia e odontologia. O osso alógeno tem sido indicado como biomaterial de preenchimento, com finalidade osteocondutora e osteoindutora. Mas o potencial de uso da matriz orgânica desmineralizada tem sido pouco estudado. As pesquisas em bioengenharia tecidual óssea tem avançado no intuito de associar tipos celulares diferentes à matrizes 3D modificadas. Neste estudo foram avaliados os potenciais de matrizes ósseas humanas mineralizadas (OHM) e desmineralizadas (OHD) para induzirem a proliferação e diferenciação de células tronco mesenquimais de polpas dentárias (CTPD) e de linhagens osteoblásticas primárias (OP) e imortalizadas (OI) em culturas 3D. As CTPD foram coletadas de incisivos de ratos machos wistar adultos; os OP coletados de calvária de neonatos de ratos com 3 dias de vida; e os OI adquirido comercialmente. Fragmentos ósseos foram obtidos junto ao Banco de Tecido Músculo Esquelético da Universidade de Marilia – SP (UNIOSS). A versão desmineralizada foi obtida em laboratório, utilizando solução quelante de EDTA 10%. As CTPD apresentaram características imunofenotípicas e capacidade de diferenciação similar às células tronco mesenquimais. Os OP e OI foram confirmados pela expressão de Osteopontina, BMP4, Colágeno tipo 1 e RUNX2; além de mineralizarem após 21 dias em meio osteogênico. Na caracterização das matrizes, o OHM apresentou-se opaco e com 55% dos seus poros > 500 µm; enquanto que o OHD apresentou-se translúcido, com 76% dos poros > 500 µm. O processo de desmineralização preservou os componentes da matriz orgânica, avaliados por imufluorescência de proteínas ósseas. Os índices de viabilidade dos OP e OI foram maiores quando cultivados sobre os scafflds OHD, quando comparado aos índices obtidos com OHM. As CTPD, no entanto, apresentaram resultado oposto: foram mais viáveis quando cultivadas sobre scaffolds de OHM. Os resultados de MEV revelaram que todos os tipos celulares aderiram e formaram uma camada contínua sobre ambos scaffolds. O OHD foi ainda capaz de induzir maior atividade da enzima fosfatase alcalina e nódulos de mineralização maiores em todos os tipos celulares, comparados aos dados obtidos com OHM. Os resultados obtidos indicaram, portanto, um importante potencial da matriz óssea humana desmineralizada como scaffold e utilização das CTPD para a bioengenharia tecidual óssea.