Diagnóstico e quantificação de toxoplasma gondii através de PCR em tempo real em sangue periférico de recém-nascidos com toxoplasmose congênita no estado de Minas Gerais

• Autor(a) principal: Julia Gatti Ladeia Costa
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8YQNLW
• topic: Toxoplasma gondii; Toxoplasmose congênita; PCR em tempo real; Diagnóstico molecular; Retinocoroidite; Parasitologia; Toxoplasma gondii; Coriorretinite; Toxoplasmose congênita; PCR em tempo real

A transmissão congênita do Toxoplasma gondii em humanos tem sido associada à ocorrência de abortos, natimortos e mortalidade neonatal. Recém-nascidos infectados podem apresentar hidrocefalia, retinocoroidite, calcificações cerebrais e retardo mental ou perturbações neurológicas. A maioria das crianças infectadas que nascem sem sintomatologia aparente, quando não tratadas, podem desenvolver lesões oculares tardias. As estratégias de diagnóstico (sorológico ou parasitológico) comumente utilizadas possuem limitações que dificultam e/ou atrasam o diagnóstico precoce da toxoplasmose congênita, essencial para o início do tratamento e consequente melhora no prognóstico da doença. Esse trabalho tem por objetivo identificar a presença do T. gondii no DNA extraído do sangue periférico de recém-nascidos infectados. A técnica de qPCR, utilizando uma sequência repetitiva do genoma do parasito (rep529) foi testada como uma alternativa para o diagnóstico rápido da toxoplasmose congênita. O resultado de 183/220 (83,2%) amostras foi considerado pela ausência de inibidores de PCR ou produtos inespecíficos. Em 84/183 (45,9%) das amostras a presença do parasito foi confirmada pela amplificação do alvo rep529. A técnica de qPCR-rep529 obteve boa reprodutibilidade (82,86%). Doze amostras (6,5%) com diagnóstico molecular positivo foram negativos para a pesquisa de IgG após 12 meses de vida. Não foi observada associação entre a qPCR-rep529 e a presença de calcificações cerebrais, entretanto, em relação à presença de lesão ocular, a diferença foi significativa (p= 0,013), O risco relativo (RR) de uma criança ter toxoplasmose ocular, dado que a qPCR foi positiva, é 1,8 vezes maior do que em uma criança, previamente triada como positiva, onde a qPCR foi negativa Considerando os tipos de lesão foi demonstrado que as crianças com retinocoroidite ativa possuem RR de 2,3 (p = 0,009) e as com retinocoroidite cicatrizada de 1,9 (p = 0,034). Através da quantificação do número de parasitos presentes no sangue periférico dos recém-nascidos foi avaliada uma possível associação entre a carga parasitária e a idade das crianças ou os principais sinais clínicos apresentados pelas crianças infectadas: calcificações cerebrais e retinocoroidite. A carga parasitária encontrada nas crianças foi pequena, 68% das amostras positivas apresentavam o número estimado de parasitos menor que 0,5 taquizoíto/mL de sangue periférico. As crianças possuíam em média 58 meses de vida e não foi observada associação significativa entre a idade das crianças e a carga parasitária. Da mesma forma não foi observada associação entre a presença de calcificações cerebrais ou a presença de retinocoroidite e a carga parasitária. Foi observada uma variação intraespecífica no número de cópias do alvo rep529 em oito cepas de genótipo recombinante e fenótipo virulento para camundongos isoladas recentemente de casos congênitos.