Caracterização molecular de isolados de Toxoplasma gondii obtidos de crianças com toxoplasmose congênita no Estado de Minas Gerais

• Autor(a) principal: Ana Carolina de Aguiar Vasconcelos Carneiro
• Data de Publicação: 2011
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8R4KS2
• topic: isolamento; Toxoplasma gondii; genotipagem; Toxoplasmose congênita; sangue periférico; diagnóstico; molecular; PCR-RFLP; gene B1; Parasitologia; Toxoplasma gondii; Toxoplasmose congênita; Toxoplasmose; Polimorfismo de fragmento de restrição; Reação em cadeia de polimerase

Toxoplasma gondii é um parasito apicomplexo amplamente distribuído de grande importância médica. Em humanos, a transmissão congênita tem sido responsabilizada pela ocorrência de abortos, natimortos, debilidade e mortalidade neonatal. A infecção por T. gondii pode ser diagnosticada indiretamente, através de métodos sorológicos, e diretamente por isolamento do parasito em camundongos (bioensaio) e pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Através do Programa Estadual de Triagem Neonatal em Minas Gerais, 146.307 crianças foram submetidas à pesquisa de anticorpos IgM anti-T. gondii, em amostras de sangue seco em papel filtro. Dessas, 220 que apresentaram resultado positivo/duvidoso foram selecionadas para esteestudo. Foram coletadas amostras de sangue periférico desses recémnascidos para PCR e bioensaio. A toxoplasmose foi confirmada em 178crianças que apresentaram anticorpos IgG persistentes até o 12º mês de vida. A amplificação do gene B1 por nested PCR foi realizada em todas as amostras de sangue verificando 64/220 (29,1%) crianças positivas por PCR (31,46% de sensibilidade e 80,95% de especificidade). A nested PCR do gene B1 não se mostrou suficientemente sensível e específica para ser uma ferramenta útilpara o diagnóstico da toxoplasmose congênita em amostras de sangueperiférico de recém-nascidos. Através do bioensaio foram obtidos 27 isolados de T. gondii. A presença do T. gondii foi evidenciada no sangue em 15,2% (27/178) dos recém-nascidos com toxoplasmose congênita. Os isolados foram divididos em três grupos de acordo com o fenótipo de virulência para camundongos. Quatorze isolados (54%) foram caracterizados como de virulência intermediária, dez (38%) como virulentos e apenas dois (8%) foram identificados como avirulentos. A variabilidade genética dos isolados foi analisada por Tamanho de Fragmento de Restrição (PCR-RFLP) em 11 loci (SAG1, 53SAG2, SAG2 alt, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico). As cepas RH (Tipo I), ME49 (Tipo II) e VEG (Tipo III) foram utilizadas como cepas de referência. O genótipo completo foi obtido em 25/27 (92,6%) dos isolados. Quatorze genótipos diferentes foram identificados, sendo dozenovos genótipos, e um isolado com infecção mista. Dois genótipos encontrados são comuns no Brasil (BrII e BrIII). Não foi identificado nenhum genótipo arquétipo tipo I, II ou III nos isolados estudados. Não foi observada associação entre os sinais clínicos da toxoplasmose congênita e os resultados obtidos pelo diagnóstico molecular, bioensaio, virulência e genotipagem dos isolados. Este estudo confirma a variabilidade genotípica do parasito no Brasil além de ser oprimeiro registro de genotipagem de isolados de sangue de recém nascidos em nosso país.