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Aristobolo Mendes da SilvaFernanda Lins Brandao Mugge2019-08-11T01:10:56Z2019-08-11T01:10:56Z2015-03-03http://hdl.handle.net/1843/BUBD-A2GG5SPerturbações da homeostase do retículo endoplasmático (RE) levam à ativação do estresse do retículo endoplasmático, que é mediada por três proteínas transmembrana, denominadas PERK, ATF6 e IRE1. Diversas evidências indicam que fármacos antiinflamatórios não-esteróides de diversas classes, como os salicilatos Aspirina e salicilato de sódio (NaSal) podem afetar a atividade de genes e proteínas relacionadas ao estresse do RE. O tratamento de células com NaSal leva à ativação de PERK, porém não de IRE1, resultando na fosforilação de eIF2. Uma vez que o papel de ATF6 nas respostas celulares induzidas pelos salicilatos não foi ainda elucidado, nosso objetivo foi caracterizar a expressão e a atividade de ATF6 em fibroblastos embrionários murinos (MEFs) tratados com salicilato de sódio. Através de experimentos de RT-qPCR e western blot, a expressão de ATF6 foi investigada após o tratamento das células. Adicionalmente, os níveis de mRNA e de proteína foram avaliados em células deficientes da eIF2 cinase PERK. Ensaios de gene repórter de luciferase foram empregados para avaliar a atividade transcricional de ATF6 em células tratadas somente com salicilato ou pré-tratadas com salicilato e posteriormente com tunicamicina. Nós observamos que o NaSal induz um aumento na expressão do mRNA e da proteína de ATF6 em células selvagens. Ainda, uma expressão robusta do mRNA de ATF6 foi observada em células deficientes de PERK, apesar de não ter sido observado acúmulo da proteína nessas células. Curiosamente, o aumento dos níveis de mRNA e de proteína não foi acompanhado do aumento da atividade transcricional de ATF6 em células tratadas com NaSal. Ademais, o pré-tratamento com NaSal levou à inibição da atividade transcricional induzida pela tunicamicina. A avaliação da expressão de genes alvo de ATF6 indica que CHOP e GADD34 têm sua expressão induzida pelo NaSal, porém a expressão dessas moléculas não é dependente de ATF6. Esses resultados fornecem evidências adicionais que os salicilatos exercem efeitos significativos sobre a expressão e ativação de componentes do estresse do RE e nos permitem ainda definir ATF6 como um novo alvo para a ação biológica dos salicilatos.Perturbation of the homeostasis of endoplasmic reticulum (ER) triggers the ER stress response, which is mediated by three ER transmembrane proteins: PKR-like ER kinase (PERK), activation transcription factor (ATF6), and inositol-requiring kinase (IRE1). Accumulating evidence indicates that non-steroidal anti-inflammatory drugs salicylates, such as Aspirin and sodium salicylate (NaSal), affect the activity of genes and proteins implicated in ER stress. NaSal treatment of cells leads to activation of PERK, but not IRE-1, resulting in eIF2alpha phosphorylation. Because the role of ATF6 in the cellular responses induced by salicylates remains elusive, we aimed to characterize the expression and activity of ATF6 after NaSal treatment of mouse embryonic fibroblasts (MEFs). Through RT-qPCR and western-blot studies, the expression of ATF6 was determined upon treatment of cells. In addition, mRNA and protein levels of ATF6 were evaluated in cells lacking eIF2alpha kinase PERK. Luciferase reporter gene assay was used to measure ATF6-dependent gene transcriptional activation in cells that were exposed only to NaSal or pre-treated with NaSal and further treated with tunicamycin. We found that NaSal induced an increase in ATF6 mRNA and protein expression in wild type cells. Interestingly, a robust expression of ATF6 mRNA was observed in PERK-deficient cells, although the protein did not accumulate in these cells. Intriguingly, an increase in ATF6 mRNA and protein levels was not accompanied by ATF6-mediated transcriptional activation, which was otherwise inhibited by NaSal in tunicamycin-treated cells. The analysis of the expression of ATF6 target genes revealed that only CHOP and GADD34 are induced by NaSal, but also that this expression is not ATF6-dependent. These results provide additional evidence of the effects of salicylates in ER stress components, and allow us to define ATF6 as a target for the biological actions of salicylates.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGSalicilato de sódioRetículo endoplasmáticoMorfologiaHomeostaseAgentes antiinflamatóriosBiologia CelularEfeitos do fármaco anti-inflamatório salicilato de sódio sobre a expressão e ativação do fator de transcrição ATF6: implicações sobre a resposta celular ao estresse do retículo endoplasmáticoinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALdisserta__o_fernanda_lb_mugge.pdfapplication/pdf1152834https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-A2GG5S/1/disserta__o_fernanda_lb_mugge.pdfa0d6753efd4cd5a4e82b8342ab7ad2a8MD51TEXTdisserta__o_fernanda_lb_mugge.pdf.txtdisserta__o_fernanda_lb_mugge.pdf.txtExtracted texttext/plain88254https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-A2GG5S/2/disserta__o_fernanda_lb_mugge.pdf.txt65106ad2defce8a3f90cf2fdf395b1e6MD521843/BUBD-A2GG5S2019-11-14 11:05:58.494oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUBD-A2GG5SRepositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T14:05:58Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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