Estudo do papel da IL-10 endógena e da expressão de pequenos RNAs na modulação da resposta imune durante a infecção pela bactéria intracelular Brucella abortus

• Autor(a) principal: Patrícia Paiva Corsetti
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/37823
• topic: Brucella abortus,, miRNAs; IL-10; MiRNAs; Genética; Brucelose; Interleucina-10; MicroRNAs; Modulação da resposta biológica

Brucella abortus é uma bactéria Gram-negativa, que causa uma doença crônica em bovinos, humanos e outras espécies denominada brucelose. IFN-γ é crucial para o controle da B. abortus enquanto a IL-10 é conhecida por diminuir a produção desta citocina in vitro interferindo diretamente no processo da eliminação do patógeno. Associado ao papel da IL- 10, estudos recentes têm demonstrado que os miRNAs atuam na regulação póstranscricional da expressão das citocinas pró-inflamatórias. Estimulados pelo interesse em analisar o papel do controle da resposta imune inflamatória, o objetivo deste estudo foi avaliar o papel da IL-10 endógena e dos miRNAs durante a infecção pela B. abortus. No estudo do papel da IL-10, camundongos IL-10 KO ou 129 Sv/Ev foram infectados com a cepa S2308 de B. abortus e em todas as semanas analisadas, camundongos IL-10 KO apresentaram menor número de bactérias recuperadas no baço, em relação ao grupo controle, evidenciando-se a completa eliminação da bactéria com 14 semanas após a infecção. Ademais, foi observado um aumento da produção de IFN-γ, TNF-α e IL-17 em soro e em cultura dos esplenócitos, e levados níveis de IL-12 e TNF-α em BMDCs dos animais IL-10 KO quando infectados pela B. abortus. Granulomas multifocais e necrose do tecido hepático dos animais infectados foram observados em análises histopatológicas, contudo, houve uma grande redução no número de granulomas nos animais IL-10 KO. Esta redução na patologia hepática foi acompanhada do aumento no número de células Tregs e do aumento da expressão de TGF-β em cultura de esplenócitos dos animais IL-10 KO. Juntamente, os resultados demonstraram que a IL-10 modula a resposta imune próinflamatória contra B. abortus e a ausência desta citocina aumenta a resistência à infecção por esta bactéria. A fim de estudar o papel dos miRNAs nesta infecção, amostras de RNA total de BMDMs não infectados ou infectados foram sequenciados restringindo-se à análise de pequenos RNAs. Os resultados do RNAseq demonstraram que 81% das reads foram mapeadas em genes codificadores de miRNAs. Setecentos e quarenta e cinco miRNAs foram identificados em ambas bibliotecas, onde 18 miRNAs apresentaram-se diferencialmente expressos. Destes, 7 miRNAs foram validados com aumento de expressão e 5 miRNAs com diminuição de expressão. Dos miRNAs validados, foi observada a dependência da molécula MyD88 para o aumento da expressão do mmu-miR-181a-5p e do mmu-miR-99a-5p. O mmu-miR-328-3p apresentou diferenças na expressão quando comparados ao animal C57BL/6 na ausência de STING, mas não em células de MyD88 KO. Os mmu-miR-21a-5p, mmu-miR-98-5p e mmu-miR-146b-5p demostraram que a molécula MyD88 tem um importante papel na manutenção da diminuição da expressão destes miRNAs. Para a molécula STING o mmu-miR-146b-5p apresentou uma diminuição de expressão ainda maior quando comparada ao animal selvagem. Dentre os miRNAs diferencialmente expressos os mmu-miR-181a-5p e mmu-miR-21a-5p foram selecionados para as análises seguintes. Análises in silico identificaram 730 putativos alvos para mmumiR- 181a-5p e 328 alvos para mmu-miR-21a-5p. Análises de enriquecimento das vias biológicas destes putativos alvos, indicaram 19 e 13 vias biológicas para os mmu-miR-181a- 5p e mmu-miR-21a-5p, respectivamente. Para as análises biológicas destes miRNAs BMDMs foram transfectados com mimic ou inhibitors específicos resultando no aumento ou na diminuição da quantidade dos miRNAs nas células. A expressão dos genes codificadores de TNF-α ou IL-10 foram analisados em células transfectadas e infectadas pela B. abortus demonstrando o efeito dos mmu-miR-181a-5p e mmu-miR-21a-5p, respectivamente, no controle da expressão destas importantes citocinas. Até o presente momento, os resultados indicam um perfil de miRNAs diferencialmente expressos durante a infecção pela B. abortus e estudos futuros irão esclarecer o papel destes miRNAs na regulação da resposta imune durante a infecção pela B. abortus.