Avaliação da nefrotoxicidade causada pela anfotericina B utilizando linhagens celulares LLC-PK1 e MDCK.2

• Autor(a) principal: Marina Felipe Grossi
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-ARJNN2
• topic: LLC-PK1; Nefrotoxicidade; Métodos alternativos; Biomarcadores; Expressão gênica; MDCK2; Nefrotoxicidade; Toxicidade; Biomarcadores; Anfotericina B

Anfotericina B (AmB), um antibiótico da classe dos macrocíclicos polienos, é um dos antifúngicos mais efetivos no tratamento de infecções fúngicas sistêmicas. Entretanto, seu uso é frequentemente limitado pela ocorrência de efeitos adversos, especialmente nefrotoxicidade. A nefrotoxicidade induzida por fármacos é um dos efeitos mais frequentemente observados em farmacoterapias de longo prazo. Essas situações têm sido descobertas tardiamente devido aos métodos atuais para determinação da toxicidade. O presente estudo teve por objetivo propor métodos alternativos in vitro para identificação precoce da toxicidade celular causada pela Anfotericina B. Para tanto, duas linhagens celulares renais, LLC-PK1 (túbulo proximal) e MDCK.2 (túbulo distal), foram expostas a nove diferentes concentrações (2, 4, 6, 8, 10, 12, 15, 20 e 30 ìg/mL) de AmB durante 24 horas. Os testes de expressão gênica foram realizados de acordo com os resultados do ensaio de MTT. Um grupo de genes nefrotóxicos sensíveis e específicos foi escolhido com base em estudos anteriores in vitro e in vivo. A busca de sequências de mRNAs que codificam proteínas, previamente associados com danos renais, foi realizada nas bases de dados do National Center for Biotechnology Information - NCBI (EUA). O RNA total foi extraído a partir das células expostas e foi realizado RT-PCR para avaliar o perfil de expressão diferencial dos genes selecionados. Os genes com a maior expressão incluem: HAVCR1 (Kim-1), CASP3, ANXA5 e VDAC.