| spelling |
Carlos Alberto TagliatiMarina Felipe Grossi2019-08-12T19:54:12Z2019-08-12T19:54:12Z2016-03-31http://hdl.handle.net/1843/BUBD-ARJNN2Anfotericina B (AmB), um antibiótico da classe dos macrocíclicos polienos, é um dos antifúngicos mais efetivos no tratamento de infecções fúngicas sistêmicas. Entretanto, seu uso é frequentemente limitado pela ocorrência de efeitos adversos, especialmente nefrotoxicidade. A nefrotoxicidade induzida por fármacos é um dos efeitos mais frequentemente observados em farmacoterapias de longo prazo. Essas situações têm sido descobertas tardiamente devido aos métodos atuais para determinação da toxicidade. O presente estudo teve por objetivo propor métodos alternativos in vitro para identificação precoce da toxicidade celular causada pela Anfotericina B. Para tanto, duas linhagens celulares renais, LLC-PK1 (túbulo proximal) e MDCK.2 (túbulo distal), foram expostas a nove diferentes concentrações (2, 4, 6, 8, 10, 12, 15, 20 e 30 ìg/mL) de AmB durante 24 horas. Os testes de expressão gênica foram realizados de acordo com os resultados do ensaio de MTT. Um grupo de genes nefrotóxicos sensíveis e específicos foi escolhido com base em estudos anteriores in vitro e in vivo. A busca de sequências de mRNAs que codificam proteínas, previamente associados com danos renais, foi realizada nas bases de dados do National Center for Biotechnology Information - NCBI (EUA). O RNA total foi extraído a partir das células expostas e foi realizado RT-PCR para avaliar o perfil de expressão diferencial dos genes selecionados. Os genes com a maior expressão incluem: HAVCR1 (Kim-1), CASP3, ANXA5 e VDAC.Amphotericin B (AmB), a polyene macrolide antibiotic, is one of the most effective antifungal drug for the treatment of systemical fungal infecction. However, its use is often limited by the occurrence of adverse events, especially nephrotoxicity. Druginduced nephrotoxicity is one of the manly frequently observed effects in long-term pharmacotherapy. Such situations have been tardily discovered because of existing methods to determine its toxicity. The present study was designed to propose in vitro alternative methods for early identification of AmB cell toxicity. Therefore, we exposed two different renal cell lines, LLC-PK1 (proximal tubule) and MDCK.2 (distal tubule), to nine different concentrations (2, 4, 6, 8, 10, 12, 15, 20 and 30 ìg/mL) of AmB during 24 hours. Gene tests were carried out according to results from MTT assay. A panel of sensitive and specific nephrotoxic genes was selected based on earlier in vitro and in vivo studies. The search for sequences of mRNAs encoding proteins that had been previously associated with kidney damage was conducted in the databases of the National Center for Biotechnology Information - NCBI (USA). RNA was extracted from the cells, and RT-PCR was performed to evaluate differential gene expression profiles of the selected genes. The genes with the highest fold change include HAVCR1 (KIM1), CASP3, ANXA5, and VDAC1.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGNefrotoxicidadeToxicidadeBiomarcadoresAnfotericina BLLC-PK1NefrotoxicidadeMétodos alternativosBiomarcadoresExpressão gênicaMDCK2Avaliação da nefrotoxicidade causada pela anfotericina B utilizando linhagens celulares LLC-PK1 e MDCK.2info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALdisserta__o_finalizada___marina_grossi_2016.pdfapplication/pdf1485526https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-ARJNN2/1/disserta__o_finalizada___marina_grossi_2016.pdf5b907f00ff333e0e6eb38234f6c96cadMD51TEXTdisserta__o_finalizada___marina_grossi_2016.pdf.txtdisserta__o_finalizada___marina_grossi_2016.pdf.txtExtracted texttext/plain92122https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-ARJNN2/2/disserta__o_finalizada___marina_grossi_2016.pdf.txtc241411fb1a9de3fdcef1ba872d9ad41MD521843/BUBD-ARJNN22019-11-14 19:43:25.113oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUBD-ARJNN2Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T22:43:25Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
|