Construção e avaliação funcional de uma linhagem invasiva de Lactococcus lactis produtora da forma citoplasmática do antígeno Hsp65 de Mycobacterium leprae

• Autor(a) principal: Vanessa Pecini da Cunha
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-ADCLCD
• topic: Lactococcus lactis; Doença de Crohn; Doenças inflamatórias intestinais; Proteínas do choque térmico; Genética

A mucosa intestinal possui um complexo sistema imune que está em homeostase com a microbiota. Entretanto, a quebra desse equilíbrio pode contribuir para o desenvolvimento de doenças inflamatórias intestinais (IBDs), como a Doença de Crohn (CD). A CD é uma doença multifatorial, caracterizada por uma inflamação crônica e descontrolada da mucosa intestinal, e sua ocorrência vem crescendo no mundo todo, principalmente em países desenvolvidos. O tratamento é realizado com esteróides, imunomoduladores e cirurgia, contudo, estão atrelados a sérios efeitos colaterais. Assim, diante dessa problemática, há necessidade de desenvolvimento de tratamentos mais eficazes aos portadores dessa enfermidade. Neste contexto, as proteínas do choque térmico, também conhecidas como HSPs, poderiam ser uma interessante alternativa. As HSPs são chaperonas importantes para a sobrevivência das células e são encontradas em todas as formas de vida. Além disso, as HSP60 são consideradas antígenos imunodominantes importantes na regulação das células T efetoras, com grande potencial na diminuição das respostas Th1 e aumento das respostas Th2 e Treg, respostas essas necessárias para o controle da CD. Sendo assim, a utilização de bactérias lácticas, como Lactococcus lactis, para a produção e a entrega de proteínas terapêuticas, como Hsp65, diretamente no interior das células da mucosa intestinal do hospedeiro, pode representar uma nova estratégia para o tratamento da CD. No presente trabalho, foi construída a linhagem invasiva (L. lactis NCDO2118 FnBPA+) e a linhagem invasiva e produtora de Hp65 de Mycobacterium leprae [L. lactis NCDO2118 FnBPA+ (pXYCYT:Hsp65)]. Ambas as linhagens foram capazes de invadir células eucarióticas mais eficientemente que a linhagem selvagem (L. lactis NCDO2118), e, além disso, a linhagem produtora de Hsp65 foi capaz de produzir a proteína citoplasmática recombinante. Com relação à segurança, após a administração intragástrica das linhagens invasivas em camundongos Balb/C imunossuprimidos, essas não foram capazes de translocar através do lúmem intestinal para outros órgãos. Dessa forma, L. lactis NCDO2118 FnBPA+ (pXYCYT:Hsp65) apresenta um grande potencial para a realização de ensaios terapêuticos para a CD experimental.