Participação da proteinase CMS2MS3 na atividade antimetastática de fração do látex de Vasconcellea cundinamarcensis: efeitos sobre a adesão e morte celular

• Autor(a) principal: Dalton Dittz Junior
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AAHF9Q
• topic: Vasconcellea cundinamarcensis; Adesão; Melanoma; Integrina; Apoptose; Farmacologia; Fisiologia

Nosso grupo de pesquisa demonstrou que frações proteolíticas de látex Vasconcellea cundinamarcensis (P1G10 e CMS2) têm atividade antitumoral e antimetastática em melanoma murino com redução da adesão e migração celular e indução de apoptose. Quando CMS2 é submetida à cromatografia em resina Mono- S Sepharose (FPLC), cinco proteases (CMS2MS1-5) são isoladas. Nosso objetivo foi identificar a(s) protease(s) presentes nas frações menos purificadas, e avaliar aatividade na adesão e morte celular que contribuem para os efeitos previamente descritos na linhagem celular de melanoma murino metastático (B16F10). Dentre as cinco proteases analisadas, CMS2MS3 mostrou a menor CC-50 (7,81 g/mL) em comparação com as demais (34,5 - 303,5 g/mL). Todas as proteases, especialmente CMS2MS3 (10 - 50 g/mL), reduziram a adesão de B16F10 à placas de poliestireno. CMS2MS3 também promoveu uma redução na adesão de célulasB16F10 aos componentes da matriz extracelular, especialmente vitronectina e laminina, após o tratamento com 10 g/mL por 2, 4, 8 ou 24 h. O nível das subunidades 4, 5 e 1 de integrina foi reduzido por CMS2MS3 10 g/mL em todos os tempos analisados, mostrando que este efeito contribui, pelo menos parcialmente, para a perda da adesão. A quantidade de vinculina/célula reduziu em 65-85% a partir de 2h de exposição à CMS2MS3, mostrando que a adesão focal pode estar ligada às integrinas composta pelas subunidades 4, 5 ou 1. Após 2 -24h de exposição à CMS2MS3, a quantidade de DNA sub-diplóide aumentou apenas para a concentração de 50 g/mL, embora, na concentração de 10 g/mL, já se observa uma redução nos níveis intracelulares de pró-caspases 3 e 9, a partir de 2h de exposição, mostrando que a morte celular ocorre por apoptose e após a perdada adesão. Observou-se, também, um aumento rápido do cálcio nuclear e mitocondrial após a exposição de B16F10 à CMS2MS3 10 g/mL, o que pode estar relacionado à liberação de citocromo c e ativação da apoptose. Assim, dentre as cinco proteases de CMS2, CMS2MS3 apresentou o melhor efeito citotóxico e capacidade de reduzir a adesão, mediada pelas subunidades 4, 5 e 1 de integrinas, nas células B16F10. A morte celular, por apoptose, ocorre após a perda de adesão e, associado a este último efeito, contribui para reduzir a capacidade decolonização pulmonar.