Análise molecular do gene prkar1a na odontogênese e nos tumores odontogênicos mistos

• Autor(a) principal: Silvia Ferreira de Sousa
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-9ZCN2H
• topic: Odontogênese; situ; PRKAR1A; Hibridização in; Patologia molecular; Tumores odontogênicos mistos; Odontogênese; Hibridização in situ; Tumores odontogênicos; Patologia molecular

Os tumores odontogênicos constituem um grupo raro e heterogêneo que guardam muitas similaridades com os germes dentários. Os tumores derivados do epitélio e ectomesênquima odontogênicos com ou sem a formação de tecido duro são classificados pela Organização Mundial de Saúde (OMS) como tumores odontogênicos mistos (TOM). Neste grupo de tumores se encontram o fibroma ameloblástico (FA), no qual é descrita a transformação da contraparte ectomesenquimal em fibrossarcoma ameloblástico (FSA), o fibrodentinoma ameloblástico (FDA) e o fibroodontoma ameloblástico (FOA). A proteína quinase A dependente de AMPc (PKA) é o principal mediador de AMPc em mamíferos e é um tetrâmero composto por duas subunidades reguladoras e duas catalíticas. Dos genes que codificam as subunidades de PKA, o único em que já foi descrito mutações em neoplasias humanas é o PRKAR1A. O gene PRKAR1A é um gene supressor de tumor que codifica a subunidade reguladora 1 (R1) da PKA. PRKAR1A está envolvido na patogênese dos mixomas odontogênicos, um tumor derivado do ectomesênquima do germe dentário, que exibe perda de expressão da proteína PRKAR1A e presença de mutações. Como os TOM compartilham dessa origem ectomesenquimal, juntamente com a participação do epitélio odontogênico, é possível que possuam similaridades com os mixomas odontogênicos em sua patogênese molecular. Este estudo objetivou investigar o padrão de expressão do gene PRKAR1A na odontogênese murina e humana, além de investigar a ocorrência de alterações moleculares deste gene nos FA, FDA, FOA e FSA. Investigamos ainda, se camundongos Prkar1a+/- desenvolvem tumores odontogênicos. Para o estudo da odontogênese, embriões humanos e de camundongos em diferentes estágios do desenvolvimento foram processados para análise de expressão do RNAm do PRKAR1A/Prkar1a e PRKAR2A/Prkar2a por hibridização in situ whole-mount e radioativa. Expressão dos transcritos dos genes foi também verificada por qRT-PCR em germe dentário humano. Para investigar as alterações moleculares do PRKAR1A nos tumores odontogênicos, foram utilizadas 13 amostras de TOM e as técnicas de qRT-PCR, imunoistoquímica, perda de heterozigosidade (LOH) e sequenciamento direto. Os TOM foram microdissecados e o componente epitelial foi separado do mesenquimal por microdissecção à laser em 7/13 casos. Cabeças de camundongos Prkar1a+/- foram incluídas em parafina e coradas por HE. Os genes das subunidades R1 e R2 mostraram expressão nos germes dentários de murinos e humanos nas fases da odontogênese avaliadas por hibridização in situ ou qRT-PCR. A análise dos tumores odontogênicos mostrou um decréscimo significativo nos níveis de expressão do RNAm de PRKAR1A em comparação à mucosa oral normal, enquanto que a expressão de PRKAR2A não mostrou diferença entre os grupos. Os TOM exibiram também um padrão variável na imunoexpressão da PRKAR1A, apresentando perda de imunoexpressão em ambos os componentes do tumor e principalmente no ectomesênquima dos FA. Houve LOH na maior parte dos tumores avaliados, sendo que, em todos os tumores benignos que exibiram perda de imunoexpressão, observamos também LOH no lócus de PRKAR1A. Mutações ainda não descritas foram identificadas em quatro amostras, sendo uma missense, duas silenciosas, além de duas mutações em 5UTR e quatro mutações intrônicas. Os camundongos Prkar1a+/- não mostraram evidência de formação de tumor odontogênico. Conclui-se que os genes PRKAR1A/Prkar1a e PRKAR2A/Prkar2a estão expressos durante a odontogênese normal e que a expressão do PRKAR1A nos TOM está diminuída. A diminuição na expressão do RNAm e proteína do gene PRKAR1A ocorreu juntamente com LOH no lócus do gene. Embora a haploinsuficiência de Prkar1a em camundongo não tenha sido suficiente para causar tumores odontogênicos, alterações moleculares neste gene estão presentes nos TOM, participando da patogênese molecular destes tumores.