Avaliação da susceptibilidade de aggregatibacter actinomycemcomitans a compostos de inclusão com amoxicilina e doxiciclina em um modelo de biofilme dentário in vitro

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Andressa Milholo Coelho
Data de Publicação: 2013
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-9JFFDN
Resumo: O Aggregatibacter actinomycemcomitans (A.a) é uma das principais bactérias associadas com as periodontites e sua capacidade de formar biofilmes é um fator de virulência que contribui para o agravamento da doença. Este estudo teve como objetivo preparar os compostos de inclusão de amoxicilina (AMOX) e doxiciclina (DOX) com hidroxipropil-- ciclodextrina (HpCd) na razão molar de 1:1 e caracterizá-los físico-químicamente em estado sólido e líquido por espectroscopia de absorção na região do infravermelho transformada de Fourier (FTIR) e por ressonância magnética nuclear (RMN), respectivamente. A atividade antimicrobiana dos compostos de inclusão foi avaliada na forma planctônica e num modelo de biofilme de A.a (ATCC 29522) in vitro. A concentração inibitória mínima do biofilme (MBIC) foi determinada pelo teste de cristal violeta, após exposição de 4, 16 e 24 horas aos agentes antimicrobianos. Estes agentes foram considerados eficazes quando os valores de biomassa do biofilme foram iguais ou inferiores a 50% do controle positivo (MBIC50). Além disso, as possíveis alterações morfológicas causadas pelos tratamentos com antimicrobianos foram verificadas no crescimento de bactérias no biofilme por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os resultados mostraram que os compostos de inclusão AMOX/HpCd e DOX/HpCd em todas as concentrações testadas foram mais eficazes na inibição do crescimento de bactérias planctônicas e na redução de biomassa de biofilme após 24 horas de exposição quando comparados com os antibióticos puros. Os compostos de AMOX/HpCd atingiram 42,2% na redução do biofilme na concentração de 2g/mL (p<0,05) enquanto o composto DOX/HpCd foi extremamente efetivo atingindo 62,1% de redução de biomassa no biofilme na concentração de 1g/mL (p<0,05) após 24 h. Análises das microscopias demonstraram que o dano à membrana celular é um dos importantes mecanismos que contribui para os efeitos antimicrobianos dos compostos de AMOX/HpCd e DOX/HpCd. Concluí-se que há uma maior susceptibilidade dos biofilmes de A.a aos compostos de inclusão de amoxicilina e de doxiciclina quando complexadas em HpCd, inibindo quantitativamente a biomassa in vitro.
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A concentração inibitória mínima do biofilme (MBIC) foi determinada pelo teste de cristal violeta, após exposição de 4, 16 e 24 horas aos agentes antimicrobianos. Estes agentes foram considerados eficazes quando os valores de biomassa do biofilme foram iguais ou inferiores a 50% do controle positivo (MBIC50). Além disso, as possíveis alterações morfológicas causadas pelos tratamentos com antimicrobianos foram verificadas no crescimento de bactérias no biofilme por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os resultados mostraram que os compostos de inclusão AMOX/HpCd e DOX/HpCd em todas as concentrações testadas foram mais eficazes na inibição do crescimento de bactérias planctônicas e na redução de biomassa de biofilme após 24 horas de exposição quando comparados com os antibióticos puros. Os compostos de AMOX/HpCd atingiram 42,2% na redução do biofilme na concentração de 2g/mL (p<0,05) enquanto o composto DOX/HpCd foi extremamente efetivo atingindo 62,1% de redução de biomassa no biofilme na concentração de 1g/mL (p<0,05) após 24 h. Análises das microscopias demonstraram que o dano à membrana celular é um dos importantes mecanismos que contribui para os efeitos antimicrobianos dos compostos de AMOX/HpCd e DOX/HpCd. Concluí-se que há uma maior susceptibilidade dos biofilmes de A.a aos compostos de inclusão de amoxicilina e de doxiciclina quando complexadas em HpCd, inibindo quantitativamente a biomassa in vitro.The Aggregatibacter actinomycemcomitans (Aa) is one of the main bacteria associated with periodontitis and their ability to form biofilms is a virulence factor that contributed to the aggravation of the disease. This study aimed to prepare inclusion compounds with amoxicillin (AMOX) and doxycycline (DOX) with hydroxypropyl--cyclodextrin (HpCd) in 1:1 molar ratio and characterize them physico-chemically in liquid and solid state by Fourier transformed infrared spectroscopy (FTIR), and nuclear magnetic resonance (NMR), respectively. The antimicrobial activity of the inclusion compounds was evaluated in planktonic form and in a biofilm model of Aa (ATCC 29522) in vitro. The minimum inhibitory biofilm concentration (MBIC) was determined by crystal violet assay after exposure to 4, 16 and 24h to the antimicrobial agents. Antimicrobial agents were considered effective when values of biofilm biomass were found to be equal or lower than 50% of the positive control (MBIC50). Also, Scanning Electron Microscopy (SEM) was used to verify biofilm bacterial growth and to assess cellular membrane integrity and morphologic changes caused by the drug treatments. Our data have shown that amoxicillin/hydroxypropyl-- cyclodextrin (AMOX/Hp!Cd, 1:1 molar ratio) and doxycycline/hydroxypropyl-- cyclodextrin (DOX/HpC, 1:1 molar ratio) were more effective in reducing biofilm biomass after 24 h of biofilm exposure when compared with the antibiotics alone in all concentrations tested. AMOX/HpCd achieved 42.2% of biofilm reduction at 2g/mL (p<0.05) while DOX/Hpd was extremely effective achieving 62.1% of biofilm reduction at 1g/mL (p<0.05) after 24 h. SEM images demonstrated that cell membrane damage is one of the important mechanism that contributes to the antimicrobial effects of AMOX/Hp!Cd and DOX/Hp!Cd compounds. It can be concluded that there is a greater susceptibility of Aa biofilms to the inclusion compounds of amoxycillin and doxycycline when complexed in Hp!Cd, inhibiting quantitatively the biofilm biomass in vitro.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGDoxiciclina/uso terapêuticoPeriodontiteCiclodextrinasBiofilmeBiofilmes/efeito de drogasCiclodextrinas/uso terapêuticoAmoxicilina/uso terapêuticoAggregatibacter actinomycetemcomitansAmoxicilinaDoxiciclinaBiofilmeCiclodextrinaAvaliação da susceptibilidade de aggregatibacter actinomycemcomitans a compostos de inclusão com amoxicilina e doxiciclina em um modelo de biofilme dentário in vitroinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALdisserta__o_andressa_final.pdfapplication/pdf18367790https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUOS-9JFFDN/1/disserta__o_andressa_final.pdfdc595c1e651e716029c81091d1075cf0MD51TEXTdisserta__o_andressa_final.pdf.txtdisserta__o_andressa_final.pdf.txtExtracted texttext/plain144029https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUOS-9JFFDN/2/disserta__o_andressa_final.pdf.txta59cfd3a782abbe5f5fa8983dc98982cMD521843/BUOS-9JFFDN2019-11-14 15:15:01.475oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUOS-9JFFDNRepositório de PublicaçõesPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T18:15:01Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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