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Rodrigo Otávio Silveira Silvahttp://lattes.cnpq.br/1439472527834751http://lattes.cnpq.br/3644332656937225Carolina Pantuzza Ramos2024-01-09T18:05:07Z2024-01-09T18:05:07Z2023-05-31http://hdl.handle.net/1843/62505CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorA infecção por Clostridioides difficile (ICD) é de grande relevância em suínos neonatos, dado principalmente às perdas produtivas e manifestações clínicas associadas às lesões colônicas causadas pelos principais fatores de virulência do patógeno, as exotoxinas A (TcdA) e B (TcdB). A necessária aplicação de métodos de controle e prevenção de C. difficile e/ou seus fatores de virulência é potencializada pelo caráter zoonótico do agente, sendo os casos comunitários da infecção considerados emergentes e em ascensão. O agente, que se encontra disseminado em diversos países, incluindo o Brasil, possui o seu controle dependente principalmente de medidas sanitárias e, atualmente, de uma vacina baseada em toxoides A e B, cujos dados de eficácia em granjas positivas ainda são desconhecidos. Contudo, métodos imunoprofiláticos compostos por proteínas recombinantes, tecnologia sabidamente vantajosa para a produção industrial, ainda não existem. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo o desenvolvimento de duas vacinas recombinantes a partir de fragmentos imunogênicos das toxinas A e B de C. difficile para a prevenção da infecção em leitões. A seleção dos fragmentos antigênicos para elaboração das vacinas, formados pela porção C-terminal das toxinas A e B, contou com ensaios in silico para a avaliação da possível presença de epítopos para células B, bem como otimização dos códons para expressão em E. coli. Dada a montagem do vetor plasmideal sintético, clonagem em E. coli e expressão das proteínas, o estudo seguiu com a realização de testes de esterilidade, inocuidade e potência em hamsters. Ainda, foi realizada a imunização de coelhos em três doses e utilizando-se duas diferentes massas antigênicas de ambas as vacinas, seguido da realização de ensaios na espécie alvo, para análise e quantificação da produção de IgG anti-TcdA e anti-TcdB por ELISA. Foram sinterizadas duas vacinas: bivalente (AB), composta por fragmentos recombinantes de TcdA e de TcdB; e quimera (Q), correspondente à síntese dos mesmos fragmentos em uma única proteína. As vacinas recombinantes sintetizadas apresentaram-se estéreis e inócuas, apesar de não terem protegido os hamsters sírios, altamente susceptíveis à infecção, após o seu desafio. Títulos de anticorpos anti-TcdA e TcdB foram observadas a partir da primeira imunização dos coelhos com as vacinas AB e Q. O platô da reatividade entre os anticorpos presentes no soro dos animais e os antígenos foi atingido com a realização de duas doses, sendo desnecessária a aplicação de uma terceira dose (p≤0,05). Ainda, não foi observado diferenças significativas entre as massas antigênicas presentes nas vacinas (10 e 50 μg), tampouco foi observada diferença entre as vacinas Q e AB em coelhos (p≥0,05). Similarmente ao observado em coelhos, a presença de anticorpos anti-TcdA e anti-TcdB foi observada nas porcas imunizadas com a primeira dose de ambas as vacinas AB e Q (20 μg cada). A colostragem dos leitões neonatos por porcas vacinadas resultou em aquisição de imunidade passiva anti-TcdA e anti-TcdB pelos animais, em contraste com os leitões controle (p≤0,05). A imunização de porcas com a vacina Q conferiu títulos de anticorpos anti-TcdA e anti-TcdB superiores aos títulos induzidos pela vacina AB no soro dos leitões, sugerindo a superioridade deste composto como imunógeno contra as toxinas A e B de C. difficile. Em conclusão, o presente estudo mostrou que as proteínas recombinantes sintetizadas foram capazes de induzir títulos de anticorpos contra as proteínas A e B de C. difficile em matrizes suínas, sendo passivamente transferidos aos leitões colostrados que possivelmente tornaram-se protegidos contra a infecção por C. difficile.porUniversidade Federal de Minas GeraisPrograma de Pós-Graduação em Ciência AnimalUFMGBrasilVET - DEPARTAMENTO DE MEDICINA VETERINÁRIA PREVENTIVAhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/pt/info:eu-repo/semantics/openAccessClostridiosesDiarreia em animaisAvaliação de imunogenicidade de formulados vacinais recombinantes contra Clostridioides difficileinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGCC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-8811https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/62505/2/license_rdfcfd6801dba008cb6adbd9838b81582abMD52ORIGINALCarolina_tese_final.pdfCarolina_tese_final.pdfapplication/pdf16205535https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/62505/6/Carolina_tese_final.pdfb6516145ea58c6122f3f21c0258ca888MD56LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82118https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/62505/7/license.txtcda590c95a0b51b4d15f60c9642ca272MD571843/625052024-01-09 15:05:08.548oai:repositorio.ufmg.br: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ório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2024-01-09T18:05:08Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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