Estudo químico da alga Lithothamnion calcareum e avaliação da atividade inibitória do rolamento de leucócitos

• Autor(a) principal: Cristiane Mota Soares
• Data de Publicação: 2009
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/EMCO-7SMPDM
• topic: Inibição do rolamento de leucócitos; Lithothamnion calcareum; Caracterização química; Alga marinha; Polissacarídeos sulfatados; Química farmacêutica; Polissacarídeos; Agentes antiinflamatórios; Algas marinhas

Lithothamnion calcareum (Hapalidaceae) é uma alga marinha encontrada em águas profundas, comercializada no Brasil e no exterior como suplemento nutricional de cálcio e outros minerais. A ocorrência de polissacarídeos em espécies de algas marinhas já foi anteriormente relatada e diversos efeitos biológicos foram descritos para substâncias dessa classe, incluindo atividade antiinflamatória, o que motivou o presente estudo. O material vegetal foi obtido de fonte comercial (Phoster Algamar, Belo Horizonte, Brasil). Inicialmente foram avaliadas diferentes condições extrativas para a obtenção de polissacarídeos de L.calcareum, incluindo extração em meio aquoso à temperatura ambiente e a quente (40, 60, 70, 80 e 100 °C), bem como extração em meio básico com solução aquosa de Na2CO3 a 1% e 2 % m/v, a quente (60 °C). O percentual de extrativos variou de 0,008 a 0,050%, sendo maior emmeio básico (Na2CO3 a 2 % m/v, 60 °C). Na seqüência, os extratos foram submetidos à precipitação com solução de etanol / água (4:1), visando obter frações enriquecidas em polissacarídeos, as quais foram dialisadas em membrana de celulose (cut off 10.000 Da). Os polissacarídeos foram isolados por cromatografia em colunas de exclusão por tamanho (Sephadex G100 e G25) e troca iônica (Sepharose Fast Flow), sendo o monitoramento das frações realizado após reação colorimétrica com fenol-ácido sulfúrico, em placas demicrotitulação. Foram isolados 4 polissacarídeos, cuja composição química foi caracterizada pela quantificação dos teores de sulfato, realizada por turbidimetria, e de ácido urônico, proteínas e açúcares totais, determinados por métodos colorimétricos. A massa molecular dos polissacarídeos isolados foi estimada por filtração molecular em cromatografia de alta eficiência de exclusão por tamanho (HPSEC), a partir da comparação com padrões de pululanas, de diferentes massas moleculares. Os polissacarídeos obtidos apresentaram massasmoleculares na faixa de 38 ± 2 a 270 ± 20 KDa, com teores de ácido urônico entre 1,7 ± 0,1 e 9,0 ± 1,0 %. O teor de proteínas variou de 3,0 ± 1,0 a 32,0 ± 1,0% e a porcentagem de açúcares totais de 6,0 ± 1,0 a 51,0 ± 2,0%. Já a concentração de sulfato atingiu 37 ± 5% em alguns polissacarídeos e teve como valor mínimo 3 ± 3%. A natureza polissacarídica das substâncias isoladas foi confirmada por análises espectroscópicas no infravermelho. A potencial atividade antiinflamatória da fração enriquecida em polissacarídeos e das substâncias isoladas foi avaliada in vivo em modelo de inibição de rolamento de leucócitos,através de microscopia intravital de vênulas do músculo cremáster de camundongos. Salina e fucoidina foram utilizadas, respectivamente, como controles negativo e positivo. Os polissacarídeos sulfatados B1P 1-19 e B1P 22-37 inibiram o rolamento de leucócitos em aproximadamente 90% após administração por via intravenosa (100 mg/mL), atividade comparável ao controle positivo, administrado na dose de 10 mg/Kg. A análise da composição química e atividade biológica dos polissacarídeos isolados indica que alto grau desulfatação e massa molecular elevada favorecem a atividade inibitória do rolamento de leucócitos. O isolamento de polissacarídeos de L. calcareum, sua caracterização química e avaliação da potencial atividade antiinflamatória é descrita pela primeira vez no presentetrabalho.