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Fernao Castro BragaDanielle da Gloria de SouzaFabíola Dutra RochaCristiane Mota Soares2019-08-12T03:28:50Z2019-08-12T03:28:50Z2009-02-19http://hdl.handle.net/1843/EMCO-7SMPDMLithothamnion calcareum (Hapalidaceae) é uma alga marinha encontrada em águas profundas, comercializada no Brasil e no exterior como suplemento nutricional de cálcio e outros minerais. A ocorrência de polissacarídeos em espécies de algas marinhas já foi anteriormente relatada e diversos efeitos biológicos foram descritos para substâncias dessa classe, incluindo atividade antiinflamatória, o que motivou o presente estudo. O material vegetal foi obtido de fonte comercial (Phoster Algamar, Belo Horizonte, Brasil). Inicialmente foram avaliadas diferentes condições extrativas para a obtenção de polissacarídeos de L.calcareum, incluindo extração em meio aquoso à temperatura ambiente e a quente (40, 60, 70, 80 e 100 °C), bem como extração em meio básico com solução aquosa de Na2CO3 a 1% e 2 % m/v, a quente (60 °C). O percentual de extrativos variou de 0,008 a 0,050%, sendo maior emmeio básico (Na2CO3 a 2 % m/v, 60 °C). Na seqüência, os extratos foram submetidos à precipitação com solução de etanol / água (4:1), visando obter frações enriquecidas em polissacarídeos, as quais foram dialisadas em membrana de celulose (cut off 10.000 Da). Os polissacarídeos foram isolados por cromatografia em colunas de exclusão por tamanho (Sephadex G100 e G25) e troca iônica (Sepharose Fast Flow), sendo o monitoramento das frações realizado após reação colorimétrica com fenol-ácido sulfúrico, em placas demicrotitulação. Foram isolados 4 polissacarídeos, cuja composição química foi caracterizada pela quantificação dos teores de sulfato, realizada por turbidimetria, e de ácido urônico, proteínas e açúcares totais, determinados por métodos colorimétricos. A massa molecular dos polissacarídeos isolados foi estimada por filtração molecular em cromatografia de alta eficiência de exclusão por tamanho (HPSEC), a partir da comparação com padrões de pululanas, de diferentes massas moleculares. Os polissacarídeos obtidos apresentaram massasmoleculares na faixa de 38 ± 2 a 270 ± 20 KDa, com teores de ácido urônico entre 1,7 ± 0,1 e 9,0 ± 1,0 %. O teor de proteínas variou de 3,0 ± 1,0 a 32,0 ± 1,0% e a porcentagem de açúcares totais de 6,0 ± 1,0 a 51,0 ± 2,0%. Já a concentração de sulfato atingiu 37 ± 5% em alguns polissacarídeos e teve como valor mínimo 3 ± 3%. A natureza polissacarídica das substâncias isoladas foi confirmada por análises espectroscópicas no infravermelho. A potencial atividade antiinflamatória da fração enriquecida em polissacarídeos e das substâncias isoladas foi avaliada in vivo em modelo de inibição de rolamento de leucócitos,através de microscopia intravital de vênulas do músculo cremáster de camundongos. Salina e fucoidina foram utilizadas, respectivamente, como controles negativo e positivo. Os polissacarídeos sulfatados B1P 1-19 e B1P 22-37 inibiram o rolamento de leucócitos em aproximadamente 90% após administração por via intravenosa (100 mg/mL), atividade comparável ao controle positivo, administrado na dose de 10 mg/Kg. A análise da composição química e atividade biológica dos polissacarídeos isolados indica que alto grau desulfatação e massa molecular elevada favorecem a atividade inibitória do rolamento de leucócitos. O isolamento de polissacarídeos de L. calcareum, sua caracterização química e avaliação da potencial atividade antiinflamatória é descrita pela primeira vez no presentetrabalho.Lithothamnion calcareum (Hapaladiceae) is a marine alga found in deep waters, commercialized in Brazil and abroad as food supplement of calcium and other minerals. Polysaccharides have been reported as constituents of marine algae, possessing severalbiological activities, including anti-inflammatory effect. The species was obtained from a commercial source (Phoster Algamar, Belo Horizonte, Brazil). Different conditions for polysaccharide extraction were evaluated, including aqueous medium under heating (40, 60,70, 80 and 100°C) and alkaline extraction with 1% and 2% w/v Na2CO3 solution, at 60 °C. Ethanol was added to the extracts (4:1) for polysaccharide precipitation, following dialysation(cut off 10,000 Da) and extract concentration. Extractives ranged from 0.008 to 0.050%, being the highest yield found for alkaline extraction (2% w/v Na2CO3, 60 °C). The polysaccharide mixture was fractionated by size exclusion chromatography (Sephadex G-100 and G-25) andion exchange chromatography (Sepharose Fast Flow). The obtained compounds were characterized by UV and IR spectrometry, in addition to colorimetric reaction with phenolsulphuric acid. Four polysaccharides were isolated and had their chemical compositioncharacterized by quantification of sulfate content, carried out by turbidimetry, along with uronic acid, proteins and total sugar contents, determined by colorimetric methods. The molecular weight (MW) was estimated by high performance size exclusion chromatography(HPSEC), by comparison with pullulan standards of different MW. The polysaccharides presented MW in the range 38 ± 2 to 270 ± 20 KDa and uronic acid contents from 1.7 ± 0.1 to 9.0 ± 1.0 %. The protein proportion varied from 3.0 ± 1.0 to 32.0 ± 1.0%, whereas total sugarcontent was found between 6.0 ± 1.0 and 51.0 ± 2.0%. On its turn, sulfate contents reached up to 37 ± 5% in some polysaccharides and showed minimum value of 3 ± 3%. The antiinflammatory activity was assayed in mice, using a model of leukocyte rolling inhibition(n=3) employing intravital microscopy. Fucoidin and saline were employed as positive and negative controls, respectively. The intravenous injection of sulfated polyssaccharides B1P 1- 19 (100 mg/Kg) and B1P 22-37 (100 mg/Kg) in mice reduced leukocyte rolling byapproximately 90%, whereas fucoidin (10 mg/Kg) induced a similar response. Analysis of chemical composition and biological activity induced by the polysaccharides indicate that high level of sulfatation and high MW favour inhibition of leukocyte rolling. The isolationand chemical characterization of polysaccharides from L. calcareum and the evaluation of their potential anti-inflammatory activity are here reported for the first time.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGQuímica farmacêuticaPolissacarídeosAgentes antiinflamatóriosAlgas marinhasInibição do rolamento de leucócitosLithothamnion calcareumCaracterização químicaAlga marinhaPolissacarídeos sulfatadosEstudo químico da alga Lithothamnion calcareum e avaliação da atividade inibitória do rolamento de leucócitosinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALdisserta__o_vers_o_final.pdfapplication/pdf1465042https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/EMCO-7SMPDM/1/disserta__o_vers_o_final.pdffff5d82073100743f3e88f3f8aa9cf90MD51TEXTdisserta__o_vers_o_final.pdf.txtdisserta__o_vers_o_final.pdf.txtExtracted texttext/plain183104https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/EMCO-7SMPDM/2/disserta__o_vers_o_final.pdf.txt827be24ef077f7ad6c0a369d19560d8cMD521843/EMCO-7SMPDM2019-11-14 10:32:01.282oai:repositorio.ufmg.br:1843/EMCO-7SMPDMRepositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T13:32:01Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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