Papel dos transposons de DNA da superfamília Tc1/mariner (TREM A-H) no reconhecimento de linhagens de fungos patogênicos do gênero Paracoccidioides

• Autor(a) principal: Fernanda Lourenço Alves
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/41882
• topic: Microbiologia; Microbiologia; Paracoccidioides; Filogenia; Elementos de DNA Transponíveis; Reação em Cadeia da Polimerase

O gênero Paracoccidioides é agente da paracoccidioidomicose, micose sistêmica de distribuição restrita à América Latina. O polimorfismo genético entre os isolados de Paracoccidioides tem sido extensamente demonstrado por diferentes autores, através de diversas técnicas moleculares. Trabalhos recentes revelaram a existência de duas espécies, P. lutzii e P. brasiliensis, sendo a primeira originalmente caracterizada como uma espécie filogenética denominada “Pb01-like” e a última constituída de três espécies filogenéticas, denominadas S1, PS2 e PS3. Vários tipos de marcadores moleculares vem sendo propostos para a caracterização de espécies filogenéticas no gênero Paracoccidioides. Entretanto, a maioria despende tempo e emprega técnicas bastante laboriosas e/ou caras. Elementos transponíveis tem sido usados no conhecimento da estrutura genética de fungos patogênicos, auxiliando na definição de grupos filogeneticamente relacionados e de importância epidemiológica. Um estudo recente no genoma de Paracoccidioides revelou a presença de oito famílias de transposons de DNA, denominadas TremA-H. Os elementos Trem estão distribuídos de forma desigual no genoma de isolados representativos de três espécies filogenéticas de Paracoccidioides (P. lutzii; PS2 e S1): TremC e H são encontrados em todas as espécies; TremA, B e F, nas espécies filogenéticas PS2 e S1; TremD foi detectado apenas em S1 e TremE somente em P. lutzii. Este trabalho relata o emprego de reações de amplificação em cadeia da polimerase (PCR) para avaliar a utilidade de três marcadores moleculares na discriminação de espécies filogenéticas de Paracoccidioides: 1) par de iniciadores destinados à região de indel do gene hsp70; 2) marcadores microssatélites de DNA; 3) Trem A-H. Foram estudados 48 isolados de Paracoccidioides, sendo trinta previamente classificados segundo a espécie filogenética (10 de P. lutzii, 15 de S1,3 de PS2 e 2 de PS3). 14 isolados puderam ser classificados como P. lutzii por meio do uso dos iniciadores dirigidos ao indel do gene hsp70, sendo os demais 34 isolados classificados como P. brasiliensis. Os marcadores microssatélites utilizados não conseguiram discriminar os isolados entre as três espécies filogenéticas de P. brasiliensis. Os resultados obtidos pelo uso da PCR para detecção de elementos TremA-H mostram que TremA, B, F e G são encontrados apenas em P. brasiliensis(S1, PS2 e PS3); TremE está presente apenas em P. lutzii; TremC e H estão presentes em P. lutzii e P. brasiliensis (S1, PS2 e PS3). É interessante ressaltar que em P. brasiliensis, a amplificação de TremC e TremH mostrou um padrão de duas bandas enquanto que em P. lutzii, observou-se apenas uma banda de aproximadamente 2 kb. Em isolados PS3, TremD mostra um padrão de três bandas. Estes resultados confirmam que os padrões de amplificação observados para os oito elementos TremA-H e seu padrão esperado de bandas, podem ser úteis como marcadores moleculares espécie-específicos no gênero Paracoccidioides.