Caracterização in silico da proteína Sortase A de Streptococcus pneumoniae e avaliação de seu potencial imunogênico em modelo animal

• Autor(a) principal: Jéssica Amanda Marques Souza
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-A3KF4J
• topic: Genética; Genética

Streptococcus pneumoniae é uma bactéria Gram-positiva de ampla dispersão mundial. É o principal agente etiológico de infecções pulmonares, meningite e sepse, sendo classificados mais de 90 sorotipos. Embora as vacinas existentes, baseadas em antígenos polissacarídeos, sejam eficientes, elas não conferem proteção contra vários sorotipos, e têm-se observado surgimento de doenças causadas por sorotipos não inclusos nas vacinas. Com o intuito de superar essas desvantagens e conferir uma proteção mais ampla, busca-se o desenvolvimento de uma vacina baseada em antígenos proteicos conservados entre os diferentes sorotipos de S. pneumoniae. Neste trabalho, selecionamos a proteína Sortase A (SrtA) que está ancorada a membrana do S. pneumoniae e possui um importante papel no processamento de proteínas de superfície. O objetivo foi avaliar as características imunogênicas da SrtA e o nível de conservação de sua sequência entre diferentes linhagens de S. pneumoniae através de análises in silico, além de avaliar seu potencial protetor em modelo animal. A partir das análises in silico foi possível determinar que a SrtA apresenta um peptídeo sinal compreendendo os resíduos Met1 até Asp10 e uma hélice transmembrana entre Lis13 a Tre35. Sequências SrtA de diferentes linhagens de S. pneumoniae foram alinhadas e as análises demonstraram 99% de identidade. Além disso, foram feitas predições de epítopos que demonstraram que a proteína SrtA possui três potenciais regiões antigênicas para ativação de linfócitos B. Já com relação aos epítopos de linfócitos T foram preditos epítopos na região entre os aminoácidos 33 e 137. Para confirmar a funcionalidade da SrtA como potencialmente imunogênica, o gene srtA foi clonado no vetor de expressão heteróloga pET-21a. A proteína foi expressa em Escherichia coli e após a sua purificação, sua imunogenicidade foi avaliada por Western blot utilizando soro de coelho imunizado com SrtA. Camundongos Swiss Webster foram imunizados com SrtA recombinante por via intraperitoneal e a resposta humoral foi analisada indicando que a proteína induziu a produção de IgG específica, caracterizada por uma alta taxa de IgG1 e IgG2a. Os camundongos foram desafiados e a resposta inflamatória foi avaliada. Os resultados indicaram que a SrtA é capaz de controlar o infiltrado celular no pulmão, mas não é capaz de modular o perfil de células inflamatórias. O potencial protetor da SrtA também foi avaliado utilizando como rotas de desafio as vias intranasal ou intraperitoneal. Observou-se que a SrtA é capaz de conferir proteção aos camundongos vacinados. Em conclusão, foi possível mostrar que a proteína SrtA é altamente conservada, entre diferentes linhagens de S. pneumoniae, e que é altamente imunogênica, gerando efeito protetor, in vivo. Estes resultados demonstram o potencial multivalente da SrtA para o desenvolvimento de uma vacina que possa produzir uma maior cobertura contra diferentes sorotipos de S. pneumoniae.