Mapeamento e síntese de epitopos da mutalisina II (LHF-II) metaloproteinase purificada do veneno de Lachesis muta muta
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2005 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFMG |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/1843/BUBD-936J7J |
Resumo: | Temos utilizado a técnica de SPOT-síntese para construir peptídeos lineares (doze resíduos de aminoácidos com sobreposição de nove) sobre uma superfície de celulose cobrindo toda seqüência primária de aminoácidos da mutalisina II, uma metaloproteinase responsável pela atividade hemorrágica do veneno de Lachesis muta muta (Viperidae).Soro de coelho antimutalisina II ao reagirem com estes peptídeos revelaram três principais regiões imunogênicas: uma C-terminal, Central e N-terminal da proteína. Uma seqüência peptídica de cada região imunogênica identificada foi selecionada para a síntese química. Os peptídeos foram purificados e analisados por espectrometria demassas. Estes peptídeos foram reconhecidos pelo soro de coelho antimutalisina II em um ensaio de ELISA. Os peptídeos foram acoplados ao KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin) para a produção de anticorpos antipeptídeos em coelho. Estes anticorpos reconheceram moderadamente a mutalisina II e fracamente o veneno total. Foi purificada a fração IgG do soro de coelho antipeptídeos para utilização em ensaio de inibição desta enzima. Estes anticorpos foram capazes de neutralizar a atividade proteolítica da enzima em 63,5%. |
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Carlos Delfin Chavez OlorteguiEladio Oswaldo Flores SanchezCristiano Machado GontijoRodrigo Novaes Ferreira2019-08-12T07:25:01Z2019-08-12T07:25:01Z2005-02-24http://hdl.handle.net/1843/BUBD-936J7JTemos utilizado a técnica de SPOT-síntese para construir peptídeos lineares (doze resíduos de aminoácidos com sobreposição de nove) sobre uma superfície de celulose cobrindo toda seqüência primária de aminoácidos da mutalisina II, uma metaloproteinase responsável pela atividade hemorrágica do veneno de Lachesis muta muta (Viperidae).Soro de coelho antimutalisina II ao reagirem com estes peptídeos revelaram três principais regiões imunogênicas: uma C-terminal, Central e N-terminal da proteína. Uma seqüência peptídica de cada região imunogênica identificada foi selecionada para a síntese química. Os peptídeos foram purificados e analisados por espectrometria demassas. Estes peptídeos foram reconhecidos pelo soro de coelho antimutalisina II em um ensaio de ELISA. Os peptídeos foram acoplados ao KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin) para a produção de anticorpos antipeptídeos em coelho. Estes anticorpos reconheceram moderadamente a mutalisina II e fracamente o veneno total. Foi purificada a fração IgG do soro de coelho antipeptídeos para utilização em ensaio de inibição desta enzima. Estes anticorpos foram capazes de neutralizar a atividade proteolítica da enzima em 63,5%.SPOT - synthesis technique has been used to construct immobilized linear peptides (twelve amino acids residues overlapping nine residues) over cellulose surface covering the entire primary amino acid sequence of mutalisin II, a metalloproteinase responsible for hemorrhagic activity of Lachesis muta muta venom. Rabbit serum against mutalisin II reacted with these peptides and revealed three major immunogenic regions: a C-terminal, a Central and N-terminal of the protein. A peptide sequence of each identified immunogenic region was selected for its chemical synthesis. The peptides were purified and analyzed by mass spectroscopy and these peptides were recognized by rabbit serumagainst mutalisin II in an ELISA assay. The peptides were coupled to KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin) for the production of antipeptides antibodies in rabbit. These antibodies had a mild recognition of mutalisin II and a weak recognition of the whole venom. The IgG fraction of the rabbit serum antipeptides was purified for an inhibition assay of this enzyme. These antibodies were capable to inhibit the proteolitic activity ofthe enzyme by 63,5%.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGImunologiaBioquímicaBioquímica e ImunologiaMapeamento e síntese de epitopos da mutalisina II (LHF-II) metaloproteinase purificada do veneno de Lachesis muta mutainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALdisserta__o_de_mestrado.pdfapplication/pdf2716633https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-936J7J/1/disserta__o_de_mestrado.pdf0341de7733d90bc6dec62b4c882d155eMD51TEXTdisserta__o_de_mestrado.pdf.txtdisserta__o_de_mestrado.pdf.txtExtracted texttext/plain105015https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-936J7J/2/disserta__o_de_mestrado.pdf.txt11028c09fc017b4af2a276ac57b5cfafMD521843/BUBD-936J7J2019-11-14 11:22:35.22oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUBD-936J7JRepositório de PublicaçõesPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T14:22:35Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false |
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