Estudo comparativo da migração, integração e diferenciação de células-tronco mesenquimais provenientes de diferentes fontes em tecido retiniano lesado

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Paula Castanheira
Data de Publicação: 2009
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-8A5JR4
Resumo: Nosso objetivo foi avaliar a migração, integração e diferenciação retiniana de células-tronco mesenquimais (CTM) injetadas na cavidade vítrea de ratos portadores de lesões retinianas. Estudos morfológicos foram feitos em ratos Wistar adultos submetidos a múltiplas lesõesretinianas por meio do YAG laser foram submetidos à injeção intravítrea de células-tronco mesenquimais marcadas com DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindol) e Quantum Dot. Em duas, quatro e oito semanas o tecido retiniano lesado/tratado foi estudado com a finalidade de se avaliar a migração, integração e diferenciação retiniana.Para quantificação relativa de sobrevivência e efeito parácrino celular foram realizados ensaios de real time PCR em ratos Lewis submetidos a lesão com laser e injeção de CTMs EGFP. As células injetadas nacavidade vítrea sobreviveram na retina por pelo menos 8 semanas e de acordo com ensaios morfológicos por imunohistoquímica, quase todas CTM migraram para a retina neural e após 8 semanas a maioria das células marcadas com DAPI expressou rodopsina (marcador parafotorreceptores), parvalbumina (marcador para células bipolares e amácrinas) e GFAP (marcador de células gliais). Esse resultado, paralelamente a resultados obtidos com o marcador quantum dot sugere, que ocorreu difusão do DAPI para células de camadasadjacentes da retina. Resultados da quantificação relativa mostraram que as CTMs sobrevivem até 6 semanas, ocorrendo aumento de níveis gênicos de fatores neuroprotetores como BDNF e VEGF. Células-tronco injetadas na cavidade vítrea sofrem trofismo para o sítio de lesão. Não é possível afirmar se ocorrem diferenciação e incorporação de células-tronco mesenquimais na retina de ratos após injeção intravítrea destas células, pois a difusão do DAPI dificulta a interpretação dos resultados.
id UFMG_d56585cc4f756ab6b08cc26c8e247fc9
oai_identifier_str oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUBD-8A5JR4
network_acronym_str UFMG
network_name_str Repositório Institucional da UFMG
repository_id_str
spelling Alfredo Miranda de GoesMarcio Bittar NehemyAntonio Lucio Teixeira JuniorGregory Thomas KittenAlexandre Leite Rodrigues OliveiraNance Beyer NardiPaula Castanheira2019-08-10T13:28:47Z2019-08-10T13:28:47Z2009-10-16http://hdl.handle.net/1843/BUBD-8A5JR4Nosso objetivo foi avaliar a migração, integração e diferenciação retiniana de células-tronco mesenquimais (CTM) injetadas na cavidade vítrea de ratos portadores de lesões retinianas. Estudos morfológicos foram feitos em ratos Wistar adultos submetidos a múltiplas lesõesretinianas por meio do YAG laser foram submetidos à injeção intravítrea de células-tronco mesenquimais marcadas com DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindol) e Quantum Dot. Em duas, quatro e oito semanas o tecido retiniano lesado/tratado foi estudado com a finalidade de se avaliar a migração, integração e diferenciação retiniana.Para quantificação relativa de sobrevivência e efeito parácrino celular foram realizados ensaios de real time PCR em ratos Lewis submetidos a lesão com laser e injeção de CTMs EGFP. As células injetadas nacavidade vítrea sobreviveram na retina por pelo menos 8 semanas e de acordo com ensaios morfológicos por imunohistoquímica, quase todas CTM migraram para a retina neural e após 8 semanas a maioria das células marcadas com DAPI expressou rodopsina (marcador parafotorreceptores), parvalbumina (marcador para células bipolares e amácrinas) e GFAP (marcador de células gliais). Esse resultado, paralelamente a resultados obtidos com o marcador quantum dot sugere, que ocorreu difusão do DAPI para células de camadasadjacentes da retina. Resultados da quantificação relativa mostraram que as CTMs sobrevivem até 6 semanas, ocorrendo aumento de níveis gênicos de fatores neuroprotetores como BDNF e VEGF. Células-tronco injetadas na cavidade vítrea sofrem trofismo para o sítio de lesão. Não é possível afirmar se ocorrem diferenciação e incorporação de células-tronco mesenquimais na retina de ratos após injeção intravítrea destas células, pois a difusão do DAPI dificulta a interpretação dos resultados.To evaluate DAPI (4',6-Diamidino-2-phenylindole) as a nuclear tracer of stem cells migration and incorporation it was observed the pattern of retinal integration and differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs) injected into the vitreous cavity of rat eyes with retinal injury. For this purpose adult rat retinas were submitted to laser damage followed by transplantation of DAPI-labeled BM-MSCs grafts and double labeled DAPI and Quantum dot labeled BM-MSCs. To assess a possible DAPI diffusion as well as the integration and differentiation of DAPI labeledBM-MSCs in laser-injured retina, host retinas were evaluated 8 weeks after injury/transplantation. It was demonstrated that, 8 weeks after the transplant, most of the retinal cells in all neural retinal presented nuclear DAPI labeling, specifically in the outer nuclear layer (ONL), inner nuclearlayer (INL) and ganglion cell layer (GCL). Meanwhile, at this point, most of the double labeled BM-MSCs (DAPI and Quantum dot) remained in the vitreous cavity and no retinal cells presented the quantum dot marker. Based on these evidences we concluded that DAPI diffused toadjacent retinal cells while the nano crystals remained labeling only the transplanted BM-MSCs. Therefore, DAPI is not a useful marker for stem cells in vivo tracing experiments since, the DAPI released from dying cells in moment of the transplant are taken up by host cells in the tissue.Quantitative PCR results shows that MSCs survive for at least e weeks,. Also is was possible to observe higher levels of neuroproctetive factors such as BDNF e VEGF.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGBioquímicaBioquímicaEstudo comparativo da migração, integração e diferenciação de células-tronco mesenquimais provenientes de diferentes fontes em tecido retiniano lesadoinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALtese_paula_castanheira__final.pdfapplication/pdf2329302https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-8A5JR4/1/tese_paula_castanheira__final.pdfbcce5ed88c051a969bdcdd16b4da94efMD51TEXTtese_paula_castanheira__final.pdf.txttese_paula_castanheira__final.pdf.txtExtracted texttext/plain161422https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-8A5JR4/2/tese_paula_castanheira__final.pdf.txtbc7659016ff5cdc1b66f1b26059f9545MD521843/BUBD-8A5JR42019-11-14 10:07:30.38oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUBD-8A5JR4Repositório de PublicaçõesPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T13:07:30Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
dc.title.pt_BR.fl_str_mv Estudo comparativo da migração, integração e diferenciação de células-tronco mesenquimais provenientes de diferentes fontes em tecido retiniano lesado
title Estudo comparativo da migração, integração e diferenciação de células-tronco mesenquimais provenientes de diferentes fontes em tecido retiniano lesado
spellingShingle Estudo comparativo da migração, integração e diferenciação de células-tronco mesenquimais provenientes de diferentes fontes em tecido retiniano lesado
Paula Castanheira
Bioquímica
Bioquímica
title_short Estudo comparativo da migração, integração e diferenciação de células-tronco mesenquimais provenientes de diferentes fontes em tecido retiniano lesado
title_full Estudo comparativo da migração, integração e diferenciação de células-tronco mesenquimais provenientes de diferentes fontes em tecido retiniano lesado
title_fullStr Estudo comparativo da migração, integração e diferenciação de células-tronco mesenquimais provenientes de diferentes fontes em tecido retiniano lesado
title_full_unstemmed Estudo comparativo da migração, integração e diferenciação de células-tronco mesenquimais provenientes de diferentes fontes em tecido retiniano lesado
title_sort Estudo comparativo da migração, integração e diferenciação de células-tronco mesenquimais provenientes de diferentes fontes em tecido retiniano lesado
author Paula Castanheira
author_facet Paula Castanheira
author_role author
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv Alfredo Miranda de Goes
dc.contributor.advisor-co1.fl_str_mv Marcio Bittar Nehemy
dc.contributor.referee1.fl_str_mv Antonio Lucio Teixeira Junior
dc.contributor.referee2.fl_str_mv Gregory Thomas Kitten
dc.contributor.referee3.fl_str_mv Alexandre Leite Rodrigues Oliveira
dc.contributor.referee4.fl_str_mv Nance Beyer Nardi
dc.contributor.author.fl_str_mv Paula Castanheira
contributor_str_mv Alfredo Miranda de Goes
Marcio Bittar Nehemy
Antonio Lucio Teixeira Junior
Gregory Thomas Kitten
Alexandre Leite Rodrigues Oliveira
Nance Beyer Nardi
dc.subject.por.fl_str_mv Bioquímica
topic Bioquímica
Bioquímica
dc.subject.other.pt_BR.fl_str_mv Bioquímica
description Nosso objetivo foi avaliar a migração, integração e diferenciação retiniana de células-tronco mesenquimais (CTM) injetadas na cavidade vítrea de ratos portadores de lesões retinianas. Estudos morfológicos foram feitos em ratos Wistar adultos submetidos a múltiplas lesõesretinianas por meio do YAG laser foram submetidos à injeção intravítrea de células-tronco mesenquimais marcadas com DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindol) e Quantum Dot. Em duas, quatro e oito semanas o tecido retiniano lesado/tratado foi estudado com a finalidade de se avaliar a migração, integração e diferenciação retiniana.Para quantificação relativa de sobrevivência e efeito parácrino celular foram realizados ensaios de real time PCR em ratos Lewis submetidos a lesão com laser e injeção de CTMs EGFP. As células injetadas nacavidade vítrea sobreviveram na retina por pelo menos 8 semanas e de acordo com ensaios morfológicos por imunohistoquímica, quase todas CTM migraram para a retina neural e após 8 semanas a maioria das células marcadas com DAPI expressou rodopsina (marcador parafotorreceptores), parvalbumina (marcador para células bipolares e amácrinas) e GFAP (marcador de células gliais). Esse resultado, paralelamente a resultados obtidos com o marcador quantum dot sugere, que ocorreu difusão do DAPI para células de camadasadjacentes da retina. Resultados da quantificação relativa mostraram que as CTMs sobrevivem até 6 semanas, ocorrendo aumento de níveis gênicos de fatores neuroprotetores como BDNF e VEGF. Células-tronco injetadas na cavidade vítrea sofrem trofismo para o sítio de lesão. Não é possível afirmar se ocorrem diferenciação e incorporação de células-tronco mesenquimais na retina de ratos após injeção intravítrea destas células, pois a difusão do DAPI dificulta a interpretação dos resultados.
publishDate 2009
dc.date.issued.fl_str_mv 2009-10-16
dc.date.accessioned.fl_str_mv 2019-08-10T13:28:47Z
dc.date.available.fl_str_mv 2019-08-10T13:28:47Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://hdl.handle.net/1843/BUBD-8A5JR4
url http://hdl.handle.net/1843/BUBD-8A5JR4
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.publisher.none.fl_str_mv Universidade Federal de Minas Gerais
dc.publisher.initials.fl_str_mv UFMG
publisher.none.fl_str_mv Universidade Federal de Minas Gerais
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UFMG
instname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)
instacron:UFMG
instname_str Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)
instacron_str UFMG
institution UFMG
reponame_str Repositório Institucional da UFMG
collection Repositório Institucional da UFMG
bitstream.url.fl_str_mv https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-8A5JR4/1/tese_paula_castanheira__final.pdf
https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-8A5JR4/2/tese_paula_castanheira__final.pdf.txt
bitstream.checksum.fl_str_mv bcce5ed88c051a969bdcdd16b4da94ef
bc7659016ff5cdc1b66f1b26059f9545
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
MD5
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1803589537313587200