Participação da via de 5-Lipoxigenase no desenvolvimento da doença do Enxerto-Versus-Hospedeiro (GVHD) em camundongos: Novas possibilidade

• Autor(a) principal: Barbara Maximino Rezende Gonçalves
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/59796
• topic: Enxerto-Versus-Hospedeiro (GVHD); Medula óssea; Camundongos; Camundongos; Medula Óssea

A doença do enxerto-versus-hospedeiro (GVHD) ainda é a principal limitação do sucesso do transplante de medula óssea que é realizado para tratar doenças hematológicas malignas e não malignas. A terapia imunossupressora utilizando corticoides é o tratamento padrão e de primeira escolha para evitar o desenvolvimento da GVHD. Entretanto, a toxicidade dos esteroides, a resposta limitada dessas drogas, os pacientes que desenvolvem GVHD refratária a esteroides e a interferência no efeito enxerto-versus-tumor são os grandes desafios dessas terapias. Dessa forma, o estudo de mecanismos de desencadeamento da doença e a proposta de novas estratégias terapêuticas são de extrema importância. O leucotrieno B4 (LTB4), produzido a partir do metabolismo do ácido araquidônico pela ação catalítica da 5-lipoxigenase (5-LO), é um mediador pró-inflamatório e está associado com o desenvolvimento de várias doenças inflamatórias, incluindo a GVHD intestinal em humanos. Entretanto, o papel de LTB4 na fisiopatologia da GVHD permanece pouco compreendido. Neste trabalho, nós avaliamos a participação do eixo 5-LO/LTB4 na fisiopatologia da GVHD por meio do transplante de leucócitos deficientes em 5-LO ou a inibição farmacológica da via pelo tratamento com zileuton, uma droga comumente utilizada para o tratamento de pacientes asmáticos. Para verificar a nossa hipótese de que 5-LO participa da GVHD, nós induzimos a doença pelo transplante de 1x107 células de medula óssea e 3x107 esplenócitos isolados de camundongos selvagens ou de camundongos deficientes em 5-LO para camundongos receptores B6D2F1. Camundongos que receberam células da medula óssea e esplenócitos de camundongos singênicos (B6D2F1) não desenvolveram a doença e foram considerados o grupo controle. Para inibição farmacológica de 5-LO, a GVHD foi induzida e os camundongos receptores foram tratados com zileuton (30mg/kg, oralmente, de 12h/12h a partir do dia do transplante). Os camundongos foram monitorados a cada 2 dias para verificação da sobrevivência e sinais clínicos da GVHD. Em experimentos diferentes, o fígado, o intestino e os órgãos linfoides dos animais foram retirados e processados para análise histopatológica, quantificação de citocinas e quimiocinas e acúmulo de leucócitos. O recrutamento e a adesão de leucócitos foram avaliados por microscopia intravital nas vênulas mesentéricas. A expressão intestinal e hepática do mRNA de 5-LO também foi avaliada no início da mortalidade por PCR em tempo real. Os níveis de LTB4 foram avaliados no sangue, no fígado e no intestino de camundongos submetidos à GVHD por ensaio imunoenzimático. Além disso, avaliamos a proporção de células H2B+ e H2B+2D+ nos animais receptores e o fenômeno do enxerto-versus-leucemia (GVL) por citometria de fluxo. Embora não tenha sido observado um aumento na expressão do mRNA de 5-LO no jejuno-íleo e no fígado de camundongos submetidos à GVHD no início da mortalidade, o transplante de esplenócitos semi alogênicos deficientes em 5-LO reduziu os níveis séricos e hepáticos de LTB4 e a lesão no intestino e no fígado. Estes resultados foram associados à inibição de leucócitos pró-inflamatórios e à diminuição dos níveis de citocinas e quimiocinas. O tratamento com zileuton também reduziu os parâmetros inflamatórios associados à GVHD. Além disso, o transplante de células deficientes em 5-LO ou o tratamento com zileuton não interferiu na reconstituição da medula óssea e no efeito GVL e reduziu os sinais clínicos da doença, aumentando a taxa de sobrevivência nos animais submetidos à GVHD. Estes dados em conjunto, evidenciam a participação do eixo 5-LO/LTB4 no desenvolvimento da doença do enxerto-versus-hospedeiro, sugerindo potencial aplicação terapêutica de zileuton para o tratamento da doença em pacientes submetidos ao transplante de medula óssea.