Citólise mediada por lipídeos de Leishmania (Leishmania) amazonensis: indícios da formação de poros mediada por lisofosfatidilcolinas e seu envolvimento na invasão celular por promastigotas

• Autor(a) principal: Luiza Valença Barreto
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/50382
• topic: leishmania amazonensis; leishporina; Bioquímica e imunologia; Leishmania; Morte celular; Lisofosfatidilcolinas

Trabalhos anteriores do nosso grupo descreveram e caracterizaram uma atividade citolítica, cujo mecanismo é por formação de poros na membrana de células-alvo, tendo a molécula responsável por esta atividade sido denominada leishporina. Embora já tenham sido determinadas várias características da leishporina, a identidade molecular desta citolisina ainda permanece desconhecida. Trabalhos anteriores, também do nosso grupo, mostraram que lisofosfatidilcolinas (LPCs) purificadas a partir de extratos de promastigotas possuem atividade citolítica. No presente trabalho, estudamos a atividade citolítica de lipídeos de promastigotas de Leishmania amazonensis, na tentativa de contribuir para a identificação da leishporina e na confirmação desse mecanismo na lise mediada por lipídeos. Assim, demonstramos que extratos lipídicos (ext-lip) de promastigotas de L. amazonensis, totalmente destituídos de proteínas, são citolíticos, lisando hemácias humanas. Verificamos que ext-lip detêm toda a atividade hemolítica presente no extrato total (ext-t) e no extrato de membranas (ext-m) de promastigotas, sugerindo que os lipídeos são os responsáveis pela formação de poros e que a fração proteica não possui atividade hemolítica. Esses resultados foram corroborados pelo fato de que o perfil de atividade hemolítica dos ext-lip durante os dias de cultivo de promastigotas in vitro segue o mesmo perfil da atividade dos ext-t e ext-m.. Confirmando resultados anteriores, verificamos que ext-t e ext-m são termolábeis, sugerindo a participação de proteínas na atividade hemolítica ou em sua regulação, enquanto os lipídeos hemolíticos são, como esperado, termorresistentes. Isto nos fez hipotetizar que a leishporina seja um complexo lipoproteico, cuja parte lipídica seja a responsável pela atividade formadora de poro ou que alguma proteína do ext-t ou ext-m, seja importante para a formação de poros quando na presença do lipídeo lítico. Um achado importante foi à demonstração que a hemólise mediada por ext-lip de promastigotas é do tipo colóido-osmótica, sugerindo fortemente que o mecanismo de hemólise pelos lipídeos totais do parasito seja por formação de poros, e corroborando achados anteriores de que a hemólise mediada por LPCs purificados é do tipo colóido-osmótica. Sabendo que fosfolipases do tipo A são as enzimas responsáveis pela síntese de LPCs, utilizamos o inibidor de Rosenthal, que inibe fosfolipases A1 e A2, na cultura de promastigotas. Demonstramos que ext-t de promastigotas assim tratadas perde totalmente sua atividade hemolítica. Esses resultados sugerem assim que os LPCs são, de fato, a leishporina. Utilizando promastigotas tratadas ou não com o inibidor de Rosenthal, verificamos ainda que os parasitos sem atividade hemolítica são menos invasivos para macrófagos ou fibroblastos do que os parasitas hemolíticos, sugerindo que a leishporina seja importante no processo de invasão de células fagocíticas e não fagocíticas pelos parasitos. A obtenção desse fenótipo de promastigotas, totalmente destituído de atividade citolítica, foi um passo importante para estudos futuros da função da leishporina.