caracterização do ciclo de multiplicação de Mayaro Virus (MAYV) e análise dos potenciais efeitos antivirais de inibidores de vias de sinalização in vitro e in vivo

• Autor(a) principal: Diogo Correa Mendonca
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/54303
• topic: Alphavírus; Mayaro virus; Trametinib; MEK/ERK; JNK; Microbiologia; Alphavirus; Microscopia eletrônica de transmissão; Quinases de proteína quinase ativadas por mitógeno

Mayaro vírus (MAYV) pertence ao gênero Alphavirus, da família Togaviridae, que também inclui o CHIKV. MAYV é encontrado principalmente nas Américas Centrais e do Sul, e é transmitido por mosquitos do gênero Haemagogus causando uma doença febril seguida de artrite e artralgia debilitante, similar a causada pelo CHIKV. A febre do Mayaro pode levar a sequelas que tem impacto direto na capacidade produtiva do paciente por longos períodos o que pode levar a um prejuízo humano e econômico grave, como o que já ocorreu com o CHIKV nos últimos anos. A febre do Mayaro é considerada uma doença negligenciada devido aos poucos dados epidemiológicos e no Brasil é considerada um potencial risco de saúde pública com números de casos aumentando todo ano. Como para a maior parte das arboviroses, não existe tratamento ou vacina para o MAYV, e o desenvolvimento delas se faz necessário frente a uma futura epidemia. Um dos objetivos desse trabalho foi caracterizar as etapas do ciclo de multiplicação de MAYV estabelecendo uma linha temporal de eventos, além de avaliar o efeito de inibidores farmacológicos (IFs) no seu ciclo de multiplicação tanto in vitro quanto in vivo modelo animal. Para a caracterização do ciclo foram realizadas curvas de multiplicação com MOI 10 – 0.1, analisadas através de titulação por ensaio de placa, RT-qPCR e microscopia eletrônica de transmissão (MET). O vírus apresentou um ciclo de multiplicação rápido, caracterizado por um período de eclipse em torno das 4 horas pós infecção (h.p.i.), seguido de aumento exponencial na quantidade de partículas virais com duração entre 3 e 18 horas e fase estacionária após 24 horas. Imagens de MET utilizando MOI 10, revelaram que a penetração na célula ocorreu entre 30 m.p.i. e 1 h.p.i., o desnudamento ocorreu 2-3 h.p.i., a formação de esférulas 4 h.p.i. e do vacúolo citoplasmático II (CPV-II) 5 h.p.i., a liberação de partículas ocorreu após 4 h.p.i. aumentando exponencialemnte 6 h.p.i. Esses resultados nos possibilitaram estabelecer uma linha temporal de eventos durante o ciclo de multiplicação do MAYV incluindo algumas etapas ainda não caracterizadas, reorganização de ribossomos e formação de grupos precursores virais pré-formação de esférulas e liberação de partículas por exocitose via formas gigantes. Nos ensaios com IFs foram testados IFs de MAPKs com redução de 90% nos títulos virais 15 h.p.i. em MOI 0.1 para os inibidores Trametinib (MEK/ERK) e JNK-VIII além da observação na redução de 82% no número de partículas intracelulares verificada na MET (Trametinib). Realizamos também experimentos piloto em modelo animal utilizando camundongos C57BL/6 e em modelo de infecção com animais com 15-18 dias de idade infectados com MAYV, e o Trametinib foi capaz de reduzir a taxa de mortalidade em 75% na dose diária administrada (2mg/kg), a qual se mostrou bem tolerável para C57BL/6. Além disso, verificamos um retardo no surgimento de sinais clínicos, que foi acompanhado por redução na carga genômica observada no fígado (42%), baço (59%) e cérebro (100%). Em conclusão, nosso trabalho demonstra o potencial antiviral do IFs: 1- Trametinib (in vitro e in vivo) e 2- do JNK VIII (in vitro) contra o MAYV e caracteriza etapas do seu ciclo de multiplicação, em particular imagens obtidas através da MET, inéditas para o MAYV.