Padronização de técnica de PCR em tempo real para detecção simultânea das mutações H63D e S65C no gene HFE da hemocromatose

• Autor(a) principal: FREDERICO SCOTT VARELLA MALTA
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/64950
• topic: Hemocromatose; PCR em tempo real; Técnicas de laboratório clínico; Teste de diagnóstico molecular; Mutação; Hemocromatose; Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real; Técnicas de Diagnóstico Molecular; Mutação; Técnicas de Laboratório Clínico

A hemocromatose é a desordem genética mais comum em europeus. Está distribuída em todo o mundo sendo que nas populações mais afetadas a prevalência pode chegar a 1: 220-250 indivíduos. Ainda é uma desordem subdiagnosticada, tanto por ser considerada rara quanto pelo fato de que é descoberta quando as manifestações da doença estão totalmente estabelecidas como a cirrose, diabetes e pigmentação da pele. A confirmação do diagnóstico de hemocromatose antes do desenvolvimento de cirrose ou outras manifestações avançadas dessa desordem pode garantir que providências sejam tomadas para a manutenção da qualidade de vida do paciente. Atualmente, os guias especializados no diagnóstico e tratamento da hemocromatose recomendam a utilização de testes genéticos para o gene HFE para o auxílio na tomada de decisão nos cuidados médicos com o paciente. Portanto o desenvolvimento de novas metodologias para a identificação de mutações é um importante passo para o fornecimento de ferramentas que auxiliem os médicos. Nosso trabalho teve o objetivo de desenvolver um ensaio de PCR 5’ Nuclease com detecção em tempo real simultâneo para as mutações H63D e S65C. A utilização de sondas capazes de identificar dois polimorfismos simultaneamente em um ensaio de PCR 5’ Nuclease jamais foi relatado antes na literatura. O ensaio foi planejado com a ajuda de ferramentas de bioinformática, em seguida padronizado e validado seguindo recomendações de guias especializados na área de genética molecular. O ensaio validado também está adequado às recomendações de dois guias de boas práticas para o diagnóstico de hemocromatose. Todas as características de desempenho testadas do ensaio de PCR 5’Nuclease para detecção simultânea das mutações H63D e S65C foram validadas com sucesso e o ensaio foi considerado apto a ser utilizado na prática clínica.