Estudo das características funcionais de monócitos humanos infectados in vitro com diferentes cepas de Leishmania e análise da expressão dos transdutores de sinal e ativadores de transcrição (STATs) em linfócitos de indivíduos portadores de leishmaniose tegumentar americana

• Autor(a) principal: Agostinho Gonçalves Viana
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AELPV4
• topic: Biologia Celular; Biologia celular

A infecção humana com diferentes espécies de Leishmania leva a distintas manifestações clínicas, variando entre as formas clínicas cutânea (L. braziliensis) e visceral (L. infantum chagasi). Essas manifestações clínicas tem sido correlacionadas com diferentes características da resposta imunológica dos indivíduos que, embora bastante estudada, não está completamente elucidada. Nosso trabalho tem como hipótese que a infecção de monócitos por diferentes cepas de Leishmania leva a uma expressão diferencial de moléculas associadas à ativação celular e de expressão de citocinas e que presença de diferentes citocinas no microambiente leva a alterações na cascata de sinalização intracelular, que pode estar associadas com a evolução clínica dos pacientes. Primeiramente, foi avaliada a expressão de moléculas de ativação e expressão de citocinas em células mononucleares do sangue periférico infectadas in vitro com L. braziliensis (2904), uma cepa de referência de L. chagasi (BH46) e uma cepa selvagem de L. chagasi. Estes estudos mostraram que a indução de TLR2, TLR9 e HLA-DR foi mais baixa em monócitos infectados com L. chagasi comparando-se com L. braziliensis. Ademais, monócitos infectados com ambas as cepas de L. chagasi tiveram uma menor expressão de TNF- e uma menor razão TNF-/IL-10, resultando em uma diminuição do perfil inflamatório. Além disso, os monócitos infectados com L. chagasi foram 100 vezes menos eficaz no controle de Leishmania do que as células infectadas com L. braziliensis. Avaliando-se a expressão de moléculas de ativação e de citocinas pelos linfócitos T citotóxicos provenientes das mesmas culturas infectadas com as diferentes espécies de Leishmania, observou-se que a infecção com L. chagasi levou a uma diminuição na expressão de IFN- e IL-17 comparando-se com L. braziliensis. De maneira interessante, a infecção com a cepa Lc BH46 levou a um aumento na expressão da molécula inibidora CTLA-4 em linfócitos e a infecção por essa mesma cepa, induziu o aumento de CD80 em monócitos. A infecção pela L. braziliensis induziu um perfil mais inflamatório em linfócitos T CD8+ dado pela maior expressão de IFN- e IL-17, e também, da molécula citotóxica granzima A, quando comparado com a infecção pelas cepas de L. chagasi. Nossos resultados mostram que L. chagasi não induz uma forte resposta inflamatória, por levar a uma menor ativação nos monócitos e linfócitos humanos, comparando-se com a infecção pela L. braziliensis. Este perfil funcional pode ajudar a explicar o distinto curso clínico observado em pacientes infectados com diferentes espécies de Leishmania. Posteriormente, propusemo-nos a estudar a resposta celular para as citocinas, através da análise da expressão das moléculas fosfo-STATs em pacientes com leishmaniose cutânea. Nossos resultados mostraram um papel ativo de STATs em um ambiente inflamatório com um aumento da expressão de fosfo-STATs relacionadas à inflamação (STAT-5), principalmente em células de pacientes com leishmaniose cutânea estimuladas com antígeno de Leishmania. Além disso, houve uma diminuição na fosfo-STAT relacionada a um ambiente antiinflamatório induzida por IL-10 (STAT-3). Estes dados são compatíveis com o ambiente inflamatório observado durante a leishmaniose cutânea e indicam uma resposta ativa às citocinas inflamatórias, enquanto que, embora a IL-10 esteja presente, a resposta a esta citocina está diminuída.