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Carlos Augusto Rosahttp://lattes.cnpq.br/7261961344060120Susana JohannPatrick Van DijckBeatriz BorelliJovita Eugênia Gazzinelli Cruz MadeiraRachel Basques CaligiorneRaquel Virgínia Rocha Vilelahttp://lattes.cnpq.br/3064428090965525Natália Oliveira Pereira Maciel2021-06-01T18:52:37Z2021-06-01T18:52:37Z2014-04-30http://hdl.handle.net/1843/36231O objetivo principal deste trabalho foi determinar a ocorrência de Candida albicans e outras leveduras oportunistas em amostras de água e areia de praias dos estados do Rio de Janeiro e Paraná, buscando correlacionar estes micro-organismos com os indicadores convencionais de poluição fecal. Além disso, o potencial patogênico destas leveduras foi avaliado por meio da pesquisa de fatores de virulência e da susceptibilidade aos antifúngicos usuais. Durante o ano de 2010, foram coletadas 72 amostras de água e 144 de areia. Para o isolamento de leveduras, as amostras de água e os lavados das amostras de areia foram filtrados através de membranas estéreis que foram depositadas sobre a superfície de três diferentes meios. Para a determinação de leveduras totais, foi utilizado o ágar Extrato de Malte-Extrato de Levedura que foi incubado a 25ºC. Para isolamento diferencial de espécies de Candida potencialmente patogênicas foi utilizado o CHROMagar-Candida que foi incubado a 37ºC. O isolamento de possíveis leveduras C. albicans foi feito a 37ºC em ágar mCA. As leveduras foram identificadas por meio do sequenciamento da região D1/D2 da subunidade maior do gene do rRNA. Isolados de espécies oportunistas foram submetidos a testes de susceptibilidade aos antifúngicos fluconazol, itraconazol e anfotericina B e avaliados quanto à presença de fatores de virulência como a produção de proteinase, a adesão a células epiteliais bucais, a capacidade de sofrer morfogênese e a capacidade de formar biofilme em fragmentos de cateter in vitro e in vivo. Por fim, foram selecionadas linhagens para a realização de testes de virulência in vivo utilizando camundongos BALB/c como modelo animal. Para a quantificação de Escherichia coli foi utilizado o método do substrato definido, utilizando o reagente COLILERT. As contagens de leveduras variaram de 0 a 408 UFC/g para as areias e de 0 a 172UFC/100mL para as águas. Não foram encontradas correlações significativas entre as densidades de leveduras e de bactérias indicadoras nas amostras avaliadas. Dentre as 96 diferentes espécies de leveduras isoladas em CHROMagar-Candida, C. parapsilosis foi a mais prevalente, seguida de Rhodotorula mucilaginosa e Meyerozyma guilliermondii. Em ágar mCA, apenas três dos 74 isolados foram identificados como C. albicans. Sessenta e um por cento das 144 leveduras testadas quanto à susceptibilidade aos antifúngicos apresentaram resistência ou sensibilidade dose-dependente a pelo menos uma das drogas avaliadas. Quanto à produção de proteinase, 41% das 144 linhagens avaliadas apresentaram formação de halo em meio contendo albumina de soro bovino, sendo assim consideradas positivas. As espécies que apresentaram maiores índices de adesão às células epiteliais bucais (CEBs) foram C. albicans, com uma média de 146 leveduras aderidas a cada 50 CEBs, e Kodamaea ohmeri, com 286 leveduras aderidas a cada 50 CEBs. Todas as linhagens de C. albicans testadas foram capazes de sofrer morfogênese e formar biofilme em fragmentos de cateter tanto em experimentos in vitro quanto in vivo. Além disso, foi possível confirmar o potencial patogênico de três destas linhagens durante o ensaio de infecção disseminada. A identificação de diversas espécies de leveduras oportunistas isoladas a partir das amostras de água e areia coletadas em praias do Rio de Janeiro e Paraná, bem como a presença de fatores de virulência e a ocorrência de resistência aos antifúngicos entre as mesmas, sugerem um risco potencial à saúde de pessoas, principalmente imunocomprometidas, que utilizam estes ambientes para recreação.The main objective of this work was to determine the occurrence of Candida albicans and other opportunistic yeasts in sand and water samples from beaches in Brazil and try to correlate these microorganisms with the conventional indicators of fecal pollution. Pathogenic potential of these yeasts was also assessed by the research of virulence factors and the susceptibility to usual antifungal drugs. A total of 72 water samples and 144 sand samples were collected during the year 2010. Sand suspensions and water samples were filtered through sterile membranes and the filters were placed onto three different culture media. To determine the total yeast counts, it was used the YM agar plates that were incubated at 25ºC. For the differential isolation of Candida species, it was used the CHROMagar-Candida plates that were incubated at 37ºC. The isolation of possible C. albicans strains was performed on mCA agar at 37ºC. Yeasts were identified by sequencing of the D1/D2 variable domains of the large-subunit of the gene of the rRNA. Yeast isolates belonging to opportunistic species were evaluated regarding their susceptibility to fluconazole, itraconazole and amphotericin B. The presence of virulence factors such proteinase production, adhesion to buccal epithelial cells, morphogenesis, and the in vitro and in vivo biofilm formation on catheter pieces were also investigated. Finally, strains were selected for carrying out virulence tests using Balb/c mice as model. Escherichia coli and total coliforms were enumerated by using the defined substrate technology (Colilert). Yeast counts ranged from 0 to 408CFU/g for sand and from 0 to 172CFU/100mL for water. There were no significant correlations between yeast and indicator bacteria densities in the collected samples. Among the 96 different yeast species isolated in CHROMagar-Candida, C. parapsilosis was the most prevalent, followed by Rhodotorula mucilaginosa and Meyerozyma guilliermondii. Only three of 74 yeast isolates in mCA agar were identified as C. albicans. Sixty one percent of the 144 evaluated yeasts presented resistance or dose-dependent sensibility to at least one tested drug. Regarding the proteinase production, 41% of the 144 evaluated strains showed halo formation on medium containing bovine serum albumin, and thus were considered positive. Species that presented the highest rates of adhesion to buccal epithelial cells (BEC) were C. albicans with an average of 146 yeasts every 50 BECs, and Kodamaea ohmeri with 286 yeasts every 50 BECs. All C. albicans strains that were tested were able to undergo morphogenesis and form biofilm on the catheter fragments in experiments both in vitro and in vivo. Furthermore, it was possible to confirm the pathogenic potential of three of these strains during the disseminated infection test. The identification of several opportunistic yeast species isolated from water and sand samples collected from beaches in Rio de Janeiro and Paraná states, and the presence of virulence factors and the ocurrence of antifungal resistance among them, suggest a potential risk to health of people who use these environments for recreational purposes.CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoporUniversidade Federal de Minas GeraisPrograma de Pós-Graduação em MicrobiologiaUFMGBrasilICB - DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIAMicrobiologiaAntifúngicosFatores de virulênciaCandida albicansPraiasMicrobiologiaOcorrência, susceptibilidade a antifúngicos e fatores de virulência de leveduras oportunistas isoladas de praias dos estados do Rio de Janeiro e Paranáinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALNATALIA OLIVEIRA PEREIRA MACIEL - TESE.pdfNATALIA OLIVEIRA PEREIRA MACIEL - TESE.pdfapplication/pdf6264709https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/36231/1/NATALIA%20OLIVEIRA%20PEREIRA%20MACIEL%20-%20TESE.pdf8df37142f7f821cc4b20f54a808c0ec5MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82119https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/36231/2/license.txt34badce4be7e31e3adb4575ae96af679MD521843/362312021-06-01 15:52:37.699oai:repositorio.ufmg.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2021-06-01T18:52:37Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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