Ocorrência, susceptibilidade a antifúngicos e fatores de virulência de leveduras oportunistas isoladas de praias dos estados do Rio de Janeiro e Paraná

• Autor(a) principal: Natália Oliveira Pereira Maciel
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/36231
• topic: Microbiologia; Microbiologia; Antifúngicos; Fatores de virulência; Candida albicans; Praias

O objetivo principal deste trabalho foi determinar a ocorrência de Candida albicans e outras leveduras oportunistas em amostras de água e areia de praias dos estados do Rio de Janeiro e Paraná, buscando correlacionar estes micro-organismos com os indicadores convencionais de poluição fecal. Além disso, o potencial patogênico destas leveduras foi avaliado por meio da pesquisa de fatores de virulência e da susceptibilidade aos antifúngicos usuais. Durante o ano de 2010, foram coletadas 72 amostras de água e 144 de areia. Para o isolamento de leveduras, as amostras de água e os lavados das amostras de areia foram filtrados através de membranas estéreis que foram depositadas sobre a superfície de três diferentes meios. Para a determinação de leveduras totais, foi utilizado o ágar Extrato de Malte-Extrato de Levedura que foi incubado a 25ºC. Para isolamento diferencial de espécies de Candida potencialmente patogênicas foi utilizado o CHROMagar-Candida que foi incubado a 37ºC. O isolamento de possíveis leveduras C. albicans foi feito a 37ºC em ágar mCA. As leveduras foram identificadas por meio do sequenciamento da região D1/D2 da subunidade maior do gene do rRNA. Isolados de espécies oportunistas foram submetidos a testes de susceptibilidade aos antifúngicos fluconazol, itraconazol e anfotericina B e avaliados quanto à presença de fatores de virulência como a produção de proteinase, a adesão a células epiteliais bucais, a capacidade de sofrer morfogênese e a capacidade de formar biofilme em fragmentos de cateter in vitro e in vivo. Por fim, foram selecionadas linhagens para a realização de testes de virulência in vivo utilizando camundongos BALB/c como modelo animal. Para a quantificação de Escherichia coli foi utilizado o método do substrato definido, utilizando o reagente COLILERT. As contagens de leveduras variaram de 0 a 408 UFC/g para as areias e de 0 a 172UFC/100mL para as águas. Não foram encontradas correlações significativas entre as densidades de leveduras e de bactérias indicadoras nas amostras avaliadas. Dentre as 96 diferentes espécies de leveduras isoladas em CHROMagar-Candida, C. parapsilosis foi a mais prevalente, seguida de Rhodotorula mucilaginosa e Meyerozyma guilliermondii. Em ágar mCA, apenas três dos 74 isolados foram identificados como C. albicans. Sessenta e um por cento das 144 leveduras testadas quanto à susceptibilidade aos antifúngicos apresentaram resistência ou sensibilidade dose-dependente a pelo menos uma das drogas avaliadas. Quanto à produção de proteinase, 41% das 144 linhagens avaliadas apresentaram formação de halo em meio contendo albumina de soro bovino, sendo assim consideradas positivas. As espécies que apresentaram maiores índices de adesão às células epiteliais bucais (CEBs) foram C. albicans, com uma média de 146 leveduras aderidas a cada 50 CEBs, e Kodamaea ohmeri, com 286 leveduras aderidas a cada 50 CEBs. Todas as linhagens de C. albicans testadas foram capazes de sofrer morfogênese e formar biofilme em fragmentos de cateter tanto em experimentos in vitro quanto in vivo. Além disso, foi possível confirmar o potencial patogênico de três destas linhagens durante o ensaio de infecção disseminada. A identificação de diversas espécies de leveduras oportunistas isoladas a partir das amostras de água e areia coletadas em praias do Rio de Janeiro e Paraná, bem como a presença de fatores de virulência e a ocorrência de resistência aos antifúngicos entre as mesmas, sugerem um risco potencial à saúde de pessoas, principalmente imunocomprometidas, que utilizam estes ambientes para recreação.