Avaliação das relações de prematuridade e doença periodontal através da detecção de DNA genômico de Porphyromonas gingivalis e Aggregatibacter actinomycetemcomitans em biofilme bucal materno e tecido placentário

• Autor(a) principal: Barros, Elizete da Rocha Vieira de
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMS
• Texto Completo: https://repositorio.ufms.br/handle/123456789/2246
• topic: Aggregatibacter actinomycetemcomitans; Doenças Periodontais; Expressão Gênica; Porphyromonas gingivalis; Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real; Recém-Nascido Prematuro

A doença periodontal engloba uma série de alterações que ocorrem no periodonto a partir da formação do biofilme dental, caracterizado pela presença de uma gama de micro-organismos. Alguns destes, pelas suas características singulares, são fortemente associados à patologia, tais como Porphyromonas gingivalis e Aggregatibacter actinomycetemcomitans. O objetivo deste trabalho foi avaliar as relações de prematuridade e doença periodontal através da detecção de DNA genômico de Porphyromonas gingivalis e Aggregatibacter actinomycetemcomitans em biofilme bucal materno e tecido placentário. Para isto foram desenhados oligonucleotídios iniciadores para a detecção dos genes da RNA polimerase de Porphyromonas gingivalis e leucotoxina de Aggregatibacter actinomycetemcomitans como alvos para amplificação por PCRtr, a partir de biofilme de exsudato de sulco gengival materno, tecido placentário e sangue de cordão umbilical de 19 mulheres em situação de parto prematuro. Realizou-se também a triagem por PCRtr de 64 amostras arquivadas de DNA genômico de placentas de mães de bebês com suspeita de infecção neonatal. Como genes normalizadores utilizou-se β-actina para amostras de DNA e S26 para amostras de RNA. Para confirmação e avaliação da presença e viabilidade bacteriana, foram realizados estudos de RT-PCRtr para determinar a expressão dos mRNAs que codificam a RNA polimerase da Porphyromonas gingivalis e a leucotoxina do Aggregatibacter actinomycetemcomitans a partir de RNA total de tecido placentário, adicionados a uma avaliação por microscopia confocal de amostras de tecido placentário PCRtr positivas. Os resultados demonstraram que os primers selecionados foram eficientes e específicos para diagnóstico e estudos de expressão por PCRtr e todos os espécimes pesquisados foram viáveis para a detecção de DNA genômico dos micro-organismos investigados. A PCRtr detectou Agregatibacter actinomycetemcomitans em torno de 15%, nos três espécimes, entretanto, as amostras de biofilme das mães apresentaram o maior percentual de 16,7%. A avaliação periodontal realizada apontou que 50% das mulheres apresentavam sangramento gengival, 83% cálculo e 17% bolsa periodontal. A prevalência de Porphyromonas gingivalis foi elevada nos espécimes estudados com 100% no sangue de cordão umbilical, 95% no tecido de hilo placentário e 83% nos biofilmes de sulco gengival materno. A triagem por PCRtr de 64 amostras arquivadas de DNA genômico específicos da placenta, reforçou os achados de prevalência da Porphyromonas gingivalis demonstrando 32 (50%) positivas e 2 (3,1%) positivas para Aggregatibacter actinomycetemcomitans. A RT-PCRtr de RNA total das 19 placentas avaliadas, apresentou Leucotoxina da Agregatibacter actinomycetemomitans em 5 (31%) amostras, e 12 (75%) apresentaram a expressão de RNA polimerase específica da Porphyromonas gingivalis. Estes achados mostram que nas placentas PCRtr positivas existe uma grande porcentagem de bactérias viáveis expressando proteínas relevantes para sua proliferação. Os dados de microscopia confocal reforçam esta descoberta, sugerindo a presença de material genético bacteriano, pela consistente formação de vacúolos significativos de bactérias e material genético extra-nuclear. Os resultados obtidos das diferentes metodologias aplicadas nos espécimes avaliados demonstram uma importante relação de prematuridade e doença periodontal materna