Síntese e associação de peptídeos pré-selecionados por phage display à nanopartículas poliméricas : avaliação do potencial biomarcador em células de adenocarcinoma de cólon humano.

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Souza, Aline de
Data de Publicação: 2020
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFOP
Texto Completo: http://www.repositorio.ufop.br/jspui/handle/123456789/14419
Resumo: Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto.
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spelling Síntese e associação de peptídeos pré-selecionados por phage display à nanopartículas poliméricas : avaliação do potencial biomarcador em células de adenocarcinoma de cólon humano.Cólon - anatomia - câncerPeptídeosProteômicaPrograma de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto.O direcionamento de peptídeos ao câncer cólon-retal pode aumentar a seletividade e a especificidade no diagnóstico permitindo que esses atuem como biomarcadores. Os nanocarreadores podem proteger quimicamente e fisicamente o peptídeo de degradações químicas no trato gastrointestinal e assim possibilitar a interação com às células tumorais aumentando a seletividade e efetividade do biomarcador. O presente trabalho teve como objetivo sintetizar peptídeos pré-selecionados pela técnica de exibição de fagos (phage display) e associá-los às nanoesferas poliméricas biodegradáveis, avaliando a citotoxicidade e a interação dessas formulações com células de adenocarcinoma de cólon humano (Caco-2). Além disso, propusemos a avaliação da afinidade dos peptídeos pelos alvos moleculares proteicos. Para isso, 5 peptídeos foram sintetizados e avaliados quanto a pureza relativa e massa molecular por CLAE-UV e espectrometria de massas, respectivamente, apresentando pureza acima de 75% e massa esperada. Formulações de nanoesferas poliméricas obtidas a partir do polímero polietilenoglicol-block-poli(ácido láctico) encapsulando os peptídeos foram desenvolvidas por dois diferentes métodos: nanoprecipitação e emulsão dupla. As formulações foram caracterizadas quanto ao tamanho médio e dispersão de tamanho, potencial zeta e eficiência de encapsulamento (EE). Tamanhos de partículas entre 84 a 150 nm e EE (%) variando entre 4 a 32% foram obtidos. Não houve citotoxicidade significativa com os peptídeos livres ou encapsulados em concentrações de até 3 μM nos tempos de incubação de 6h e 24 h, indicando que como biomarcadores eles se mostraram seguros frente à linhagem Caco-2. Após marcação fluorescente dos peptideos com isotiocianato de fluoresceína a interação com célula Caco-2 mostrou que o peptídeo 1 em nanoesferas induziu maior interação com as células, onde a fluorescência se mostrou localizada no interior do citoplasma num padrão pontilhado, indicativo de internalização por vias endocíticas. Essa interação se apresentou mais intensa que no caso do peptídeo 2. A cromatografia de afinidade utilizando-se peptídeos imobilizados em colunas de sepharose evidenciouse a ligação dos peptídeos com alvos moleculares proteicos que serão futuramente identificados por análise proteômica.The targeting of peptides to colon-rectal cancer can increase selectivity and specificity in diagnosis allowing these to act as biomarkers. The nanocarriers can protect the peptide chemically and physically from chemical degradations in the gastrointestinal tract and thus enable interaction with tumor cells, increasing the selectivity and effectiveness of the biomarker. The present work aimed to synthesize pre-selected peptides using the phage display technique and associate them with biodegradable polymeric nanospheres, evaluating the cytotoxicity and the interaction of these formulations with human colon adenocarcinoma cells (Caco-2) . In addition, we proposed the assessment of peptide affinity for protein molecular targets. For this, 5 peptides were synthesized and evaluated for relative purity and molecular mass by HPLC-UV and mass spectrometry, respectively, presenting purity above 75% and expected mass. Formulations of polymeric nanospheres obtained from the polyethylene glycol-block-poly (lactic acid) polymer encapsulating the peptides were developed by two different methods; nanoprecipitation and double emulsion. The formulations were characterized in terms of average size and size dispersion, zeta potential and encapsulation efficiency (EE). Particle sizes between 84 to 150 nm and EE% ranging from 4 to 32% were obtained. There was no significant cytotoxicity with free or encapsulated peptides in concentrations of up to 3 μM in the incubation times of 6h and 24h, indicating that as biomarkers they were shown to be safe against the Caco-2 strain. After fluorescent labeling of the peptides with fluorescein isothiocyanate, interaction with Caco-2 cells showed that peptide 1 in nanospheres induced greater interaction with cells, where fluorescence was found to be located inside the cytoplasm in a dotted pattern, indicative of internalization by endocytic pathways. . This interaction was more intense than in the case of peptide 2. Affinity chromatography using peptides immobilized in columns showed the binding of the peptides to identified protein molecular targets that will be identified in the future by proteomic analysis.Mosqueira, Vanessa Carla FurtadoRúbio, Karina Taciana SantosMosqueira, Vanessa Carla FurtadoLeite, Elaine AmaralCota, Renata Guerra de SáSouza, Aline de2022-02-01T18:12:00Z2022-02-01T18:12:00Z2020info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfSOUZA, Aline de. Síntese e associação de peptídeos pré-selecionados por phage display à nanopartículas poliméricas: avaliação do potencial biomarcador em células de adenocarcinoma de cólon humano. 2020. 122 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) – Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2020.http://www.repositorio.ufop.br/jspui/handle/123456789/14419http://creativecommons.org/licenses/by-nd/3.0/us/Autorização concedida ao Repositório Institucional da UFOP pelo(a) autor(a) em 17/12/2020 com as seguintes condições: disponível sob Licença Creative Commons 4.0 que permite copiar, distribuir e transmitir o trabalho, desde que sejam citados o autor e o licenciante. 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