Caracterização de um peptídeo selecionado por Phage Display com atividade anti-tumoral

• Autor(a) principal: Grazia, Gabriela Avila de
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5155/tde-30052023-112455/
• topic: Bacteriophage library; Biblioteca de bacteriófagos; Câncer do colo do útero; CD40; CD40; Cervical cancer; HPV; HPV; Mimotope; Mimotopo; Neoplasia; Neoplasm; Peptídeos; Peptides; Phage Display; Phage Display

A relação entre infecção persistente de papilomavírus humano (HPV) de alto risco e o desenvolvimento de certos tipos de câncer está bem estabelecida. No entanto, alternativas terapêuticas para infecções e tumores causados por esses vírus são limitadas. Anteriormente, nosso grupo encontrou motivos peptídicos, a partir de um immunescreening de uma biblioteca de Phage display heptapeptídica circular baseada no fago M13, utilizando soros de participantes positivas para HPV provenientes de um estudo prospectivo de HPV e neoplasia cervical. Quatro peptídeos enriquecidos foram encontrados e, um deles, PEP1, foi selecionado para estudos posteriores. As imunizações de camundongos portadores de tumor HPV-16 positivo (linhagem celular TC-1) realizadas com o fago recombinante PEP1 (ØPEP1) resultou em redução do crescimento do tumor, onde essa redução foi associada a células T CD8 (SULAIMAN, 2017). Buscando caracterizar o mecanismo subjacente à atividade anti-tumoral observada, verificamos que ØPEP1 não se liga a linhagens celulares derivadas de tumores do colo uterino HPV positivas (SiHa e HeLa), mas possui a capacidade de se ligar a soros e plasmas derivados de mulheres com esfregaços de cérvice uterina HPV positivos e HPV negativos. A análise da sequência heptapeptidica de PEP1 mostrou que sua sequência é encontrada no CD40 humano, sugerindo que PEP1 poderia atuar como um mimotopo de CD40. Utilizando ferramentas de bioinformática, avaliamos o perfil de expressão de CD40 em tumores da cérvice uterina, onde verificamos que a expressão de CD40 é maior em carcinomas escamosos do colo do útero, quando comparado aos adenocarcinomas do colo uterino, carcinomas mucinosos e carcinomas endometrióides, estando associado a um melhor prognóstico. Em amostras de câncer da cérvice uterina, verificamos coincidência no padrão de marcação por imunohistoquimica entre ØPEP1 e CD40. A hipótese de que PEP1 poderia atuar como um mimotopo de CD40 foi testada em linhagens celulares que expressam o ligante de CD40 (CD40L), observando-se ligação específica do fago recombinante. A especificidade de ligação de ØPEP1 foi verificada por ensaios de competição com o anticorpo anti-CD40L. Em conjunto, esses dados sugerem que ØPEP1 pode atuar como mimotopo de CD40