Padronização da determinação da presença de óxido nítrico em plaquetas humanas por citometria de fluxo.

• Autor(a) principal: Maciel, Priscilla Maria Pereira.
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFPB
• Texto Completo: https://repositorio.ufpb.br/jspui/handle/123456789/541
• topic: CNPQ:: CIÊNCIAS DA SAÚDE: FÁRMACIA; Plaquetas; Citometria de fluxo; Padronização

As plaquetas desempenham papel central no processo hemostático normal e de eventos trombóticos. O óxido nítrico (NO) é uma das principais moléculas sinalizadoras responsáveis pela regulação da hemostasia. O estudo teve como objetivo padronizar e implantar a técnica de medida de óxido nítrico por citometria de fluxo no Laboratório de Farmacologia Cardiovascular do Centro de Biotecnologia da Universidade Federal da Paraíba- UFPB e determinar as condições experimentais ótimas para avaliar a produção ou presença de NO em plaquetas humanas, utilizando a técnica de citometria de fluxo. Nos experimentos foi utilizado plasma rico em plaquetas (PRP) de sangue humano. As plaquetas foram incubadas com o diacetato diaminofluoresceína (DAF- 2DA) (diacetato diaminodifluorofluoresceina), uma sonda fluorescente específica para o NO, em duas concentrações (2,5 µM e 10 µM) e por tempos de incubação de 30 e 60 minutos. A intensidade de fluorescência emitida pelo DAF2T foi determinada na presença de um clássico doador de NO, o nitroprussiato de sódio (NPS10 µM), utilizado como padrão. A incubação com o DAF- 2DA demonstrou uma mudança significativa na intensidade de fluorescência em todos os tempos de incubação, sendo o efeito mais pronunciado observado na concentração de 10 µM. Na presença do NPS a intensidade de fluorescência foi maior quando o DAF- 2DA (2,5 µM) foi incubado por 30 minutos (aumento de 41±1%) e a incubação o DAF- 2DA (10 µM) demonstrou aumento da fluorescência em todos os tempos analisados. Com base nos resultados obtidos a partir da padronização da medida de NO, concluímos que a utilização da sonda DAF-2DA na concentração de 10µM e por um período de incubação de 30 minutos demonstrou melhor eficiência em quantificar os níveis de NO em tempo real, utilizando amostras de PRP humano. Dessa forma, de acordo com nossas condições de rotina laboratorial a sonda DAF- 2DA pode ser aplicada para a determinação dos níveis de NO em plaquetas.