Modulação da expressão gênica caruncular pelo embrião bovino durante a placentação: Influência sobre fatores angiogênicos e vasoativos

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Cordeiro, Laysa Lindaura Lau Rocha
Data de Publicação: 2015
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFPB
Texto Completo: https://repositorio.ufpb.br/jspui/handle/123456789/15365
Resumo: In cattle, reproductive loss occurs mainly embryonic period (0-42 days), and one of the major cause of this issue are failures in synchronization of maternal and embryonic communication. The conceptus (embryo and extraembryonic membranes) plays a key role in controlling intrauterine environment, leading to the release of paracrine factors for gestational signaling and modulating the expression of genes in maternal endometrium, leading up to implantation and subsequent early placental development. Despite of in vitro production of embryos proves to be a useful tool in increasing productivity of cattle, this method still has gaps in successful of reproductive efficiency. This study aimed to analyze the expression of genes involved with placental vascular function in gravid and non-gravid uterine horns of primiparous cows submitted to artificial insemination (AI) and in vitro fertilization (IVF), in order to identify the regulatory role of embryo on endometrial gene expression and the influence of in vitro embryonic manipulation on this mechanism. In this study, caruncular samples of the gravid horn were collected after the separation of fetal cotyledons, occurring on days 30 (n = 3), 35 (n = 8) and 40 (n = 3) AI and 35 (n = 3) and 40 (n = 3) days IVF. Caruncles of contralateral uterine horns were collected concomitantly. All tissues were frozen in liquid nitrogen and stored at - 80°C until RNA extraction. Four genes (eNOS, GUCY1B3, EDNRB, ANGPT2) involved with placental vascular function were chosen for this study. All samples were processed by Quantitative Real Time PCR (qPCR), at where the analysis of results showed a significant increase (p<0.05) in AI gravid horns between 30 to 35 days for both EDNRB and ANGPT2 genes, while GUCY1B3 was upregulated on gravid horns only at 30 days AI. Expression levels of eNOS did not changed in AI uterine tissues. Late transcription response occurred at 40 days IVF on gravid horns for eNOS, EDNRB and ANGPT2, and no significant alterations (p <0.05) was observed for GUCY1B3. Considering the observed aspects, we conclude that the differential expression of genes on gravid horns has a direct relation with the presence of embryo, being these genes themselves liable to modifications in transcriptional pattern due to adversities imposed by manipulation and culture of in vitro embryos.
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This study aimed to analyze the expression of genes involved with placental vascular function in gravid and non-gravid uterine horns of primiparous cows submitted to artificial insemination (AI) and in vitro fertilization (IVF), in order to identify the regulatory role of embryo on endometrial gene expression and the influence of in vitro embryonic manipulation on this mechanism. In this study, caruncular samples of the gravid horn were collected after the separation of fetal cotyledons, occurring on days 30 (n = 3), 35 (n = 8) and 40 (n = 3) AI and 35 (n = 3) and 40 (n = 3) days IVF. Caruncles of contralateral uterine horns were collected concomitantly. All tissues were frozen in liquid nitrogen and stored at - 80°C until RNA extraction. Four genes (eNOS, GUCY1B3, EDNRB, ANGPT2) involved with placental vascular function were chosen for this study. All samples were processed by Quantitative Real Time PCR (qPCR), at where the analysis of results showed a significant increase (p<0.05) in AI gravid horns between 30 to 35 days for both EDNRB and ANGPT2 genes, while GUCY1B3 was upregulated on gravid horns only at 30 days AI. Expression levels of eNOS did not changed in AI uterine tissues. Late transcription response occurred at 40 days IVF on gravid horns for eNOS, EDNRB and ANGPT2, and no significant alterations (p <0.05) was observed for GUCY1B3. Considering the observed aspects, we conclude that the differential expression of genes on gravid horns has a direct relation with the presence of embryo, being these genes themselves liable to modifications in transcriptional pattern due to adversities imposed by manipulation and culture of in vitro embryos.Em bovinos, perdas reprodutivas ocorrem principalmente no período embrionário (0 – 42 dias), sendo desencadeadas principalmente por falhas na sincronização da comunicação materno-embrionária. O concepto (embrião e membranas extraembrionárias) desempenha um papel chave no controle do ambiente intrauterino, desencadeando a liberação de fatores parácrinos para sinalização gestacional e modulando a expressão de genes no endométrio materno que atuam na preparação da implantação e posterior início do desenvolvimento placentário. Apesar da produção in vitro de embriões se mostrar como uma ferramenta útil no aumento da produtividade de rebanhos, este método ainda apresenta lacunas no sucesso da eficiência reprodutiva. Este estudo objetivou analisar a expressão de genes envolvidos com a função vascular placentária em cornos uterinos gestantes e não gestantes de vacas primíparas submetidas à inseminação artificial (IA) e fertilização in vitro (FIV), buscando identificar o papel regulatório do embrião na expressão gênica endometrial e a influência da manipulação embrionária in vitro neste mecanismo. Para realização do estudo, amostras carunculares do corno gestante foram coletadas após a separação dos cotilédones fetais, ocorrendo nos dias 30 (n = 3), 35 (n = 8) e 40 (n = 3) de IA e 35 (n = 3) e 40 dias (n = 3) de FIV. Concomitantemente, carúnculas do corno uterino contralateral também foram coletadas. Todos os tecidos foram congelados em nitrogênio líquido e armazenados a – 80° C, até o momento de extração do RNA. A partir de um microarranjo previamente realizado, quatro genes (eNOS, GUCY1B3, EDNRB, ANGPT2) envolvidos com a função vascular placentária foram selecionados para o estudo. Todas as amostras foram processadas pela técnica de PCR Quantitativo em Tempo Real (qPCR), onde a análise dos resultados mostrou um aumento significativo (p<0,05) em cornos gestantes de IA entre os 30 e 35 dias para os genes EDNRB e ANGPT2, e 30 dias para GUCY1B3. Nenhuma alteração nos níveis de expressão de 5 eNOS para IA foi observado. Uma resposta de transcrição tardia ocorreu aos 40 dias em cornos gestantes de FIV para os genes eNOS, EDNRB e ANGPT2, e nenhuma alteração significativa (p<0,05) foi observada para GUCY1B3. Tendo em vista os aspectos observados, conclui-se que a expressão diferencial de genes em cornos gestantes possui relação direta com a presença do embrião, estando os mesmos genes sujeitos a modificações no padrão transcricional em virtude das adversidades impostas pela manipulação e cultura in vitro de embriões.Universidade Federal da ParaíbaBrasilCiências VeterináriasPrograma de Pós-Graduação em Ciência AnimalUFPBCampos, Danila Barreirohttp://lattes.cnpq.br/7241482802498829Cordeiro, Laysa Lindaura Lau Rocha2019-08-26T12:25:38Z2016-02-042019-08-26T12:25:38Z2015-12-14info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesishttps://repositorio.ufpb.br/jspui/handle/123456789/15365porAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFPBinstname:Universidade Federal da Paraíba (UFPB)instacron:UFPB2019-08-27T06:06:27Zoai:repositorio.ufpb.br:123456789/15365Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttps://repositorio.ufpb.br/PUBhttp://tede.biblioteca.ufpb.br:8080/oai/requestdiretoria@ufpb.br|| diretoria@ufpb.bropendoar:2019-08-27T06:06:27Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFPB - Universidade Federal da Paraíba (UFPB)false
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