Avaliação de atividades biológicas e toxicidade de extrato salino e lectina de folhas de Portulaca elatior Mart. Ex Rohrb
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Data de Publicação: | 2023 |
Tipo de documento: | Tese |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPE |
Texto Completo: | https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/55325 |
Resumo: | A biodiversidade brasileira é riquíssima e inclui uma gama de espécies vegetais com potencial biotecnológico. O presente trabalho avaliou bioatividades e toxicidade de extratos salino de folhas e caule de Portulaca elatior, e da lectina de folhas (PeLL). O extrato salino foi obtido utilizando a farinha de folhas e caules de P. elatior para extração em NaCl 0,15 M. Os extratos brutos obtidos foram caracterizados por cromatografia em camada delgada (CCD) e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE); avaliados quanto à atividade antioxidante (sequestro de DPPH e ABTS+) e determinação da capacidade antioxidante total; e mensuração da atividade fotoprotetora dos extratos por determinação do fator de proteção solar (FPS) in vitro. O extrato de folhas foi selecionado para os testes de toxicidade in vivo (toxicidade aguda oral e toxicidade dérmica) e in vitro (atividade hemolítica). PeLL foi purificada por cromatografia de afinidade em matriz de quitina, e submetida à caracterização da atividade hemaglutinante (AH) e estabilidade molecular em diferentes condições, do peso molecular (PM) e do ponto isoelétrico (pI). O potencial antimicrocrobiano de PeLL foi avaliado contra espécies de Pectobacterium sp. e Candida sp.,; e toxicidade oral aguda in vivo e atividade hemolítica foi esclarecida. Os extratos salinos de folhas e caules de P. elatior possuem em sua composição fenóis, flavonoides, açúcares redutores, terpenos e esteroides; O perfil obtido a partir de HPLC demonstra a presença de 3 picos, ambos com espectros UV's compatíveis com flavonoides nas amostras de extrato de caule e folhas, enquanto apenas SES possui um quarto pico correspondente a um tanino elágico. O extrato de folhas demonstrou maior eficácia em capturar os radicais livres ABTS+ (CI50: 34,15 μg/mL) e DPPH (CI50: 55,44 μg/mL), bem como maior CAT (CI50: 413,3 μg/mL) quando comparado ao extrato de caule (CI50 de 628,80, 2.499 e 9.475 μg/mL ABTS+ DPPH e CAT respectivamente). O extrato de folhas apresentou FPS > 6 nas concentrações de 50 e 100 μg/mL, enquanto o extrato de caule apresentou FPS < 6; além disso não causou morte nem alterações severas nos parâmetros fisiológicos, hematológicos e bioquímicos dos camundongos, bem como apresentou baixa ação hemolítica. PeLL foi purificada em um único pico de proteínas adsorvidas à matriz e foi eluída com ácido acético; Apresentou AH específica de 744,2 (fator de purificação de 1.695 vezes), uma única banda polipeptídica em eletroforese para proteínas nativas ácidas, pI 5,4 e PM de 20 kDa, A AH foi inibida por manose, galactose, Ca2+, Mg2+ e Mn2+, apresentou AH mais expressiva na faixa de pH ácido (3,0–6,0) e se manteve estável mesmo diante do aquecimento a 100°C, embora tenham sido detectadas alterações conformacionais após o aquecimento. A lectina apresentou concentração mínima inibitória (CMI) e concentração mínima bactericida (CMB) de 0,185 e 0,74 μg/mL, respectivamente, para todas as cepas de Pectobacterium sp. avaliadas. Além disso, PeLL apresentou CMI e concentração mínima fungicida (CMF) de 1,48 μg/mL para C. albicans, C. tropicalis e C. krusei; e CMI e CMF de 0,74 e 2,96 μg/mL, respectivamente, para C. parapsilosis. Nenhuma atividade hemolítica in vitro ou sinais de toxicidade aguda in vivo em camundongos foram observados. O presente estudo mostrou que os extratos salinos de caules e folhas de P. elatior demonstraram atividade antioxidante e fotoprotetora. Não apresentando toxicidade aguda oral ou dérmica letal. PeLL não apresentou toxicidade in vitro e in vivo letal demonstrando promissora atividade antimicrobiana. |
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SILVA, Suéllen Pedrosa dahttp://lattes.cnpq.br/4396551130881349http://lattes.cnpq.br/0869167120016962http://lattes.cnpq.br/0563176148137978NAPOLEÃO, Thiago HenriqueSILVA, Pollyanna Michelle da2024-03-04T14:23:19Z2024-03-04T14:23:19Z2023-07-27SILVA, Suéllen Pedrosa da. Avaliação de atividades biológicas e toxicidade de extrato salino e lectina de folhas de Portulaca elatior Mart. Ex Rohrb.. 2023. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) – Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2023.https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/55325A biodiversidade brasileira é riquíssima e inclui uma gama de espécies vegetais com potencial biotecnológico. O presente trabalho avaliou bioatividades e toxicidade de extratos salino de folhas e caule de Portulaca elatior, e da lectina de folhas (PeLL). O extrato salino foi obtido utilizando a farinha de folhas e caules de P. elatior para extração em NaCl 0,15 M. Os extratos brutos obtidos foram caracterizados por cromatografia em camada delgada (CCD) e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE); avaliados quanto à atividade antioxidante (sequestro de DPPH e ABTS+) e determinação da capacidade antioxidante total; e mensuração da atividade fotoprotetora dos extratos por determinação do fator de proteção solar (FPS) in vitro. O extrato de folhas foi selecionado para os testes de toxicidade in vivo (toxicidade aguda oral e toxicidade dérmica) e in vitro (atividade hemolítica). PeLL foi purificada por cromatografia de afinidade em matriz de quitina, e submetida à caracterização da atividade hemaglutinante (AH) e estabilidade molecular em diferentes condições, do peso molecular (PM) e do ponto isoelétrico (pI). O potencial antimicrocrobiano de PeLL foi avaliado contra espécies de Pectobacterium sp. e Candida sp.,; e toxicidade oral aguda in vivo e atividade hemolítica foi esclarecida. 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PeLL foi purificada em um único pico de proteínas adsorvidas à matriz e foi eluída com ácido acético; Apresentou AH específica de 744,2 (fator de purificação de 1.695 vezes), uma única banda polipeptídica em eletroforese para proteínas nativas ácidas, pI 5,4 e PM de 20 kDa, A AH foi inibida por manose, galactose, Ca2+, Mg2+ e Mn2+, apresentou AH mais expressiva na faixa de pH ácido (3,0–6,0) e se manteve estável mesmo diante do aquecimento a 100°C, embora tenham sido detectadas alterações conformacionais após o aquecimento. A lectina apresentou concentração mínima inibitória (CMI) e concentração mínima bactericida (CMB) de 0,185 e 0,74 μg/mL, respectivamente, para todas as cepas de Pectobacterium sp. avaliadas. Além disso, PeLL apresentou CMI e concentração mínima fungicida (CMF) de 1,48 μg/mL para C. albicans, C. tropicalis e C. krusei; e CMI e CMF de 0,74 e 2,96 μg/mL, respectivamente, para C. parapsilosis. Nenhuma atividade hemolítica in vitro ou sinais de toxicidade aguda in vivo em camundongos foram observados. O presente estudo mostrou que os extratos salinos de caules e folhas de P. elatior demonstraram atividade antioxidante e fotoprotetora. Não apresentando toxicidade aguda oral ou dérmica letal. PeLL não apresentou toxicidade in vitro e in vivo letal demonstrando promissora atividade antimicrobiana.Brazilian biodiversity includes a range of plant species that produce molecules with antimicróbica, antioxidant and photoprotective activities, among others. This study aimed to evaluate the biological activities and toxicity of saline extracts from leaves and stems of Portulaca elatior, as well as a lectin (PeLL) isolated from its leaves. The leaves or stems of P. elatior were dried, crushed and homogenized in 0.15 M NaCl to obtain saline extracts, which were subjected to chemical characterization by thin layer chromatography (TLC) and high-performance liquid chromatography (HPLC). The extracts were evaluated for antioxidant activity by DPPH and ABTS+ radical scavenging methods and determination of total antioxidant capacity (TAC). The photoprotective activity of the extracts was measured by determining the sun protection factor (SPF) in vitro. Finally, the leaf extract, with the most significant biological activities, was selected for in vivo (acute oral toxicity and dermal toxicity; 1000 and 2000 mg/kg) and in vitro (hemolytic activity; 7.81–1.000 μg/mL). For PeLL purification, the leaf extract was subjected to chitin column chromatography. PeLL was then subjected to evaluations of its hemagglutinating activity (HA) in the presence of ions, carbohydrates and different values of pH and temperature. The isoelectric point (pI), molecular mass and stability against denaturing agents (by fluorimetric analysis) were also determined. Finally, PeLL was evaluated for antimicrobial activity against Pectobacterium and Candida species, acute oral toxicity in vivo (5 and 10 mg/kg) and hemolytic activity. The results showed that extracts from leaves and stems of P. elatior have phenols, flavonoids, reducing sugars, terpenes, and steroids in their composition. In terms of antioxidant activity, the leaf extract was more effective in capturing free radicals ABTS+ (IC50: 34.15 μg/mL) and DPPH (IC50: 55.44 μg/mL), as well as higher CAT (IC50: 413.3 μg/mL) when compared to the stem extract (IC50 of 628.80, 2,499 and 9,475 μg/mL in the ABTS+, DPPH and CAT assays, respectively). This was also observed for photoprotective activity, with the leaf extract showing SPF > 6 at concentrations of 50 and 100 μg/mL, while the stem extract showed SPF < 6. The leaf extract did not cause death or changes in physiological parameters , hematological and biochemical properties of mice, as well as showed low hemolytic action. About the purification of PeLL, chromatography of the leaf extract on a chitin column resulted in a single peak of proteins adsorbed and eluted with acetic acid. PeLL showed a specific AH of 744.2 (1695-fold purification factor), a single polypeptide band on electrophoresis for acidic native proteins, pI 5.4 and a molecular mass of 20 kDa. The lectin had its AH inhibited by mannose, galactose, Ca2+, Mg2+ and Mn2+. PeLL AH remained stable even when heated to 100 °C, although conformational changes were detected after heating. PeLL showed more expressive HA in the acidic pH range (3.0– 6.0). The lectin showed minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) of 0.185 and 0.74 μg/mL, respectively, for all Pectobacterium strains evaluated. In addition, PeLL presented MIC and minimum fungicidal concentration (MFC) of 1.48 μg/mL for C. albicans, C. tropicalis and C. krusei; and MIC and MIC of 0.74 and 2.96 μg/mL, respectively, for C. parapsilosis. No in vitro hemolytic activity or signs of acute toxicity in vivo in mice were observed. A new lectin (PeLL) was purified from P. elatior leaves, showing promise due to its antimicrobial activity and not presenting relevant in vitro and in vivo toxicity in the evaluated parameters. Furthermore, saline extracts of stems and leaves of P. elatior demonstrated antioxidant and photoprotective activity. Showing no relevant acute oral or dermal toxicity in mice treated with 1000 mg/kg and slight toxicity in animals treated with 2000 mg/kg.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em Ciencias BiologicasUFPEBrasilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessFitoquímicosLectinasTestes de toxicidadeAvaliação de atividades biológicas e toxicidade de extrato salino e lectina de folhas de Portulaca elatior Mart. Ex Rohrbinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisdoutoradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPEORIGINALTESE Suéllen Pedrosa da Silva.pdfTESE Suéllen Pedrosa da Silva.pdfapplication/pdf11080912https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/55325/1/TESE%20Su%c3%a9llen%20Pedrosa%20da%20Silva.pdf9544a6b1ad1e55fd54749c56aefd1951MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-8811https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/55325/2/license_rdfe39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34MD52LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82362https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/55325/3/license.txt5e89a1613ddc8510c6576f4b23a78973MD53TEXTTESE Suéllen Pedrosa da Silva.pdf.txtTESE Suéllen Pedrosa da Silva.pdf.txtExtracted texttext/plain165776https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/55325/4/TESE%20Su%c3%a9llen%20Pedrosa%20da%20Silva.pdf.txtc4595a8ca9aec589adc7db769d996a9eMD54THUMBNAILTESE Suéllen Pedrosa da Silva.pdf.jpgTESE Suéllen Pedrosa da Silva.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1244https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/55325/5/TESE%20Su%c3%a9llen%20Pedrosa%20da%20Silva.pdf.jpg97df0ee6effe68784f1b6f25e541b3bfMD55123456789/553252024-03-06 02:23:21.535oai:repositorio.ufpe.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufpe.br/oai/requestattena@ufpe.bropendoar:22212024-03-06T05:23:21Repositório Institucional da UFPE - Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)false |
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