Atividades biológicas de moléculas extraídas de Portulaca elatior

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: SILVA, José Dayvid Ferreira da
Data de Publicação: 2020
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPE
Texto Completo: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/38954
Resumo: Plantas contêm lectinas e metabólitos secundários capazes de induzir respostas biológicas em células de plantas e animais. Portulaca elatior é uma planta da Caatinga que ainda não teve sua composição química e potencial biotecnológico amplamente estudados. Na presente tese, extratos orgânicos de caule e folhas foram avaliados quanto à composição química e suas propriedades antioxidantes, analisadas in vitro pelos ensaios de DPPH, ABTS e fosfomolibdênio, e citotóxicas frente a contra células humanas saudáveis e células leucêmicas. Adicionalmente, uma lectina do extrato da raiz de P. elatior foi isolada por cromatografia de afinidade, em coluna de quitina, e seu potencial antimicrobiano foi avaliado frente a microrganismos susceptíveis e resistentes a diversos antibióticos, além de analisar os mecanismos de ação envolvidos nas atividades antimicrobianas e a citotoxicidade da lectina. A presença de metabólitos secundários foi determinada por cromatografias líquidas de camada fina e de alta performance. Flavonoides e derivados cinâmicos foram constituintes majoritários dos extratos orgânicos apresentando uma atividade antioxidante significativa. Os extratos orgânicos testados apresentaram efeitos antiproliferativos frente a células de K562, MOLT-4 e HL-60, tendo seu IC50 variando de 5,13 a 9,66 μg/mL; não foram citotóxicos nem hemolíticos frente a células humanas saudáveis. A lectina da raiz de P. elatior (PeRoL) apresentou um ponto isoelétrico de 3.8, uma massa molecular nativa de 33 kDa, dividida em duas subunidades de 15kDa cada, ligadas por pontes de sulfeto. A atividade hemaglutinante de PeRoL não foi afetada por elevadas temperaturas e se apresentou estável na faixa de pH ácida. O dissacarídeo trealose foi identificado como o inibidor endógeno de PeRoL, presente nas raízes da planta. PeRoL apresentou atividade bacteriostática contra Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus (concentração mínima inibitória de 8.1, 32.5 e 4.06 μg/mL, respectivamente); apresentou atividade bactericida contra três cepas de S. aureus (susceptível, resistente a oxacilina e resistente a meticilina) (concentração mínima bactericida de 20, 40 e 40 μg/mL, respectivamente). Adicionalmente, foi detectado efeito sinérgico da lectina com cefuroxima e cefoxitina, contra as cepas resistentes de S. aureus, sem alterar a expressão dos fatores de virulência investigados. PeRoL não foi capaz de inibir a ação hemolítica de S. aureus, entretanto foi um agente anti-agregador para a cepa suscetível deste microrganismo. A atividade bactericida da proteína também foi detectada contra Klebsiella pneumoniae resistente a polimixina (16 μg/mL), porém não causou alterações morfométricas nas células. PeRoL induziu a morte de Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida albicans e Candida krusei com uma concentração mínima fungicida de 16 μg/mL; Para C. albicans e C. krusei a lectina inibiu a formação de biofilme, além de se ligar a glicanos presentes na parede celular fúngica. A lectina foi capaz de inibir o crescimento de todos os microrganismos testados ainda nas primeiras horas de incubação, além de não ser citotóxica e nem hemolítica para células humanas saudáveis. Em conclusão, folhas e caule de P. elatior contêm extratos orgânicos com uma ótima atividade antioxidante e antitumoral. As raízes de P. elatior contêm uma lectina ligante de trealose, termoestável e potente antimicrobiana.
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Na presente tese, extratos orgânicos de caule e folhas foram avaliados quanto à composição química e suas propriedades antioxidantes, analisadas in vitro pelos ensaios de DPPH, ABTS e fosfomolibdênio, e citotóxicas frente a contra células humanas saudáveis e células leucêmicas. Adicionalmente, uma lectina do extrato da raiz de P. elatior foi isolada por cromatografia de afinidade, em coluna de quitina, e seu potencial antimicrobiano foi avaliado frente a microrganismos susceptíveis e resistentes a diversos antibióticos, além de analisar os mecanismos de ação envolvidos nas atividades antimicrobianas e a citotoxicidade da lectina. A presença de metabólitos secundários foi determinada por cromatografias líquidas de camada fina e de alta performance. Flavonoides e derivados cinâmicos foram constituintes majoritários dos extratos orgânicos apresentando uma atividade antioxidante significativa. 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PeRoL apresentou atividade bacteriostática contra Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus (concentração mínima inibitória de 8.1, 32.5 e 4.06 μg/mL, respectivamente); apresentou atividade bactericida contra três cepas de S. aureus (susceptível, resistente a oxacilina e resistente a meticilina) (concentração mínima bactericida de 20, 40 e 40 μg/mL, respectivamente). Adicionalmente, foi detectado efeito sinérgico da lectina com cefuroxima e cefoxitina, contra as cepas resistentes de S. aureus, sem alterar a expressão dos fatores de virulência investigados. PeRoL não foi capaz de inibir a ação hemolítica de S. aureus, entretanto foi um agente anti-agregador para a cepa suscetível deste microrganismo. A atividade bactericida da proteína também foi detectada contra Klebsiella pneumoniae resistente a polimixina (16 μg/mL), porém não causou alterações morfométricas nas células. PeRoL induziu a morte de Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida albicans e Candida krusei com uma concentração mínima fungicida de 16 μg/mL; Para C. albicans e C. krusei a lectina inibiu a formação de biofilme, além de se ligar a glicanos presentes na parede celular fúngica. A lectina foi capaz de inibir o crescimento de todos os microrganismos testados ainda nas primeiras horas de incubação, além de não ser citotóxica e nem hemolítica para células humanas saudáveis. Em conclusão, folhas e caule de P. elatior contêm extratos orgânicos com uma ótima atividade antioxidante e antitumoral. As raízes de P. elatior contêm uma lectina ligante de trealose, termoestável e potente antimicrobiana.FACEPEPlants contain lectins and secondary metabolites capable of inducing biological responses in plant and animal cells. Portulaca elatior is a Caatinga plant that has not yet been widely studied for its chemical composition and biotechnological potential. In the present thesis, organic extracts of stem and leaves were evaluated for chemical composition and antioxidant properties, analyzed in vitro by DPPH, ABTS and phosphomolibdenum tests, and cytotoxic against healthy human cells and leukemic cells. Additionally, a lectin from root’s extract of P. elatior was isolated by affinity chromatography on a chitin column, and its antimicrobial potential was evaluated against susceptible and resistant microorganisms, in addition the action mechanisms involved in the antimicrobial activities and lectin cytotoxicity were evaluated. The presence of secondary metabolites was determined by thin layer and high-performance liquid chromatographies. Flavonoids and cinnamic derivatives were major constituents of organic extracts with significant antioxidant activity. The tested organic extracts showed antiproliferative effects against K562, MOLT-4 and HL-60 cells, with their IC50 ranging from 5.13 to 9.66 μg/mL; they were neither cytotoxic nor hemolytic when compared to healthy human cells. The P. elatior root lectin (PeRoL) showed an isoelectric point of 3.8, a native molecular mass of 33 kDa, divided into two subunits of 15kDa each, linked by sulfide bridges. The hemagglutinating activity of PeRoL was not affected by high temperatures and was stable in the acidic pH range. The trehalose disaccharide was identified as the endogenous PeRoL inhibitor, present in the plant's roots. PeRoL showed bacteriostatic activity against Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus (minimum inhibitory concentration of 8.1, 32.5 and 4.06 μg/mL, respectively); showed bactericidal activity against three strains of S. aureus (susceptible, resistant to oxacillin and resistant to methicillin) (minimum bactericidal concentration of 20, 40 and 40 μg / mL, respectively). Additionally, a synergistic effect of lectin with cefuroxime and cefoxitin was detected against the resistant strains of S. aureus, without altering the expression of the investigated virulence factors. PeRoL was not able to inhibit the hemolytic action of S. aureus, however it was an anti-aggregating agent for the susceptible strain of this microorganism. The bactericidal activity of the protein was also detected against polymyxin-resistant Klebsiella pneumoniae (16 μg/mL), but did not cause morphometric changes in cells. PeRoL induced the death of Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida albicans and Candida krusei with a minimum fungicidal concentration of 16 μg/mL; For C. albicans and C. krusei, the lectin inhibited biofilm formation, in addition to binding to glycans present in the fungal cell wall. Lectin was able to inhibit the growth of all tested microorganisms in the first hours of incubation, in addition to being neither cytotoxic nor hemolytic for healthy human cells. In conclusion, P. elatior leaves and stem contain organic extracts with excellent antioxidant and anti-tumor activity. The roots of P. elatior contain a thermostable and potent antimicrobial trehalose-binding lectin.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em Bioquimica e FisiologiaUFPEBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessPlantas da CaatingaLectinasAgentes anti-infecciososAtividades biológicas de moléculas extraídas de Portulaca elatiorinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisdoutoradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPEORIGINALTESE José Dayvid Ferreira da Silva.pdfTESE José Dayvid Ferreira da Silva.pdfapplication/pdf6334123https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/38954/1/TESE%20Jos%c3%a9%20Dayvid%20Ferreira%20da%20Silva.pdf25af0b14d801a1640c6d1654ad0788f7MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-8811https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/38954/2/license_rdfe39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34MD52LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; 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