Investigação da resposta imune induzida por veneno de Bothrops erythromelas em cultura de células mononucleares infectadas com Trypanosoma cruzi
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Data de Publicação: | 2018 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPE |
Texto Completo: | https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/30971 |
Resumo: | A doença de Chagas (DC) é uma infecção causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi (T. cruzi) que é transmitido aos seres humanos e a outros mamíferos por insetos triatomíneos contaminados. A única terapia disponível para o tratamento da DC no Brasil é o Benzonidazol (Bz), porém, a eficácia desse fármaco é variável, pois induz uma resposta inflamatória e causa efeitos colaterais aos pacientes. Por outro lado, o Bz associado com outras drogas é capaz de aumentar a eficácia do tratamento. Neste contexto, o veneno de serpentes tem mostrado atividades tripanocidas, todavia, os mecanismos imunológicos ainda não foram esclarecidos. O presente estudo teve como objetivo investigar o efeito do veneno de Bothrops erythromelas (B. erythromelas) sobre a resposta imune induzida em cultura de células mononucleares infectadas com formas tripomastigotas do T. cruzi e tratadas in vitro com o veneno da serpente através da detecção de citocinas (pró-inflamatórias e anti-inflamatórias). Sangue de indivíduos não portadores da doença de Chagas foi coletado em tubos de heparina para centrifugação por gradiente de densidade usando Ficoll-Hypaque onde as células mononucleares de sangue periférico (PBMC) foram separadas e infectadas com formas tripomastigotas Cepa Y de T. cruzi, seguida de adição do Bz e veneno de B. erythromelas às culturas. Após o tempo de cultivo, os sobrenadantes foram estocados para posterior análise das citocinas IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-γ e TNF por Citometric Beads Array (CBA). As células foram avaliadas por citometria de fluxo quanto à expressão das moléculas CD28⁺ e CTLA-4⁺ (em linfócitos T CD4⁺ e CD8⁺) e das moléculas CD80⁺, CD86⁺ e HLA-DR⁺ (em monócitos CD14⁺). Quanto à produção de citocinas os resultados mostraram que o veneno diminuiu a expressão de citocinas em todas as condições de ensaio em comparação aos controles. Porém, o tratamento com veneno induziu aumento da expressão de CD28⁺ em linfócitos TCD4+; e em monócitos CD14⁺, aumento da expressão das moléculas de ativação CD80⁺ e HLA-DR⁺ demonstrando que o veneno induz ativação dessas células. Por outro lado, o veneno induziu aumento da expressão de CTLA-4⁺ em linfócitos TCD4⁺ e TCD8⁺ indicando que pode conduzir a um controle da ativação exacerbada dessas células. |
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OLIVEIRA, Kamila Kássia dos Santoshttp://lattes.cnpq.br/3760558152274375http://lattes.cnpq.br/6242933635724255LORENA, Virginia Maria Barros deLUNA, Karla Patrícia de Oliveira2019-06-07T21:08:02Z2019-06-07T21:08:02Z2018-02-22https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/30971A doença de Chagas (DC) é uma infecção causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi (T. cruzi) que é transmitido aos seres humanos e a outros mamíferos por insetos triatomíneos contaminados. A única terapia disponível para o tratamento da DC no Brasil é o Benzonidazol (Bz), porém, a eficácia desse fármaco é variável, pois induz uma resposta inflamatória e causa efeitos colaterais aos pacientes. Por outro lado, o Bz associado com outras drogas é capaz de aumentar a eficácia do tratamento. Neste contexto, o veneno de serpentes tem mostrado atividades tripanocidas, todavia, os mecanismos imunológicos ainda não foram esclarecidos. O presente estudo teve como objetivo investigar o efeito do veneno de Bothrops erythromelas (B. erythromelas) sobre a resposta imune induzida em cultura de células mononucleares infectadas com formas tripomastigotas do T. cruzi e tratadas in vitro com o veneno da serpente através da detecção de citocinas (pró-inflamatórias e anti-inflamatórias). Sangue de indivíduos não portadores da doença de Chagas foi coletado em tubos de heparina para centrifugação por gradiente de densidade usando Ficoll-Hypaque onde as células mononucleares de sangue periférico (PBMC) foram separadas e infectadas com formas tripomastigotas Cepa Y de T. cruzi, seguida de adição do Bz e veneno de B. erythromelas às culturas. Após o tempo de cultivo, os sobrenadantes foram estocados para posterior análise das citocinas IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-γ e TNF por Citometric Beads Array (CBA). As células foram avaliadas por citometria de fluxo quanto à expressão das moléculas CD28⁺ e CTLA-4⁺ (em linfócitos T CD4⁺ e CD8⁺) e das moléculas CD80⁺, CD86⁺ e HLA-DR⁺ (em monócitos CD14⁺). Quanto à produção de citocinas os resultados mostraram que o veneno diminuiu a expressão de citocinas em todas as condições de ensaio em comparação aos controles. Porém, o tratamento com veneno induziu aumento da expressão de CD28⁺ em linfócitos TCD4+; e em monócitos CD14⁺, aumento da expressão das moléculas de ativação CD80⁺ e HLA-DR⁺ demonstrando que o veneno induz ativação dessas células. Por outro lado, o veneno induziu aumento da expressão de CTLA-4⁺ em linfócitos TCD4⁺ e TCD8⁺ indicando que pode conduzir a um controle da ativação exacerbada dessas células.CNPqChagas disease (CD) is an infection caused by the protozoa Trypanosoma cruzi (T. cruzi), which affects human beings and other mammals by contaminated triatomine. The only therapy available for CD disease is the Benzonidazol (Bz), althoμgh the efficacy of this drμg varies, because it induces an inflammatory response and cause collateral effects to the patients. On the other side, Bz associated to other drμgs is capable of raising the efficacy of the treatment. In this context, snake venoms have already been shown tripanosomide activities, althoμgh the immunological mechanisms are still to be enlightened. The present work aimed to investigate the effect of the venom of the snake Bothrops erythromelas (B. erythromelas) on the immune response induced in cultured mononuclear cells infected with trypomastigotes forms of T. cruzi, and treated in vitro with the venom, troμgh the detection of cytokines (pro-inflammatory and anti-inflammatory). Blood of healthy individuals was collected in tubes with heparine for centrifμgation under density gradient, using Ficoll-Hypaque, mononuclear cells of peripherical blood (PBMC) were separated and infected with tripomastigotas forms, Cepa Y of T. cruzi, followed by the addition of Bz and the venom of B. erythromelas to the cell cultures. After the period of culture, supernatants were kept for posterior analysis of cytokines IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-γ and TNF by Citometric Beads Array (CBA). Cells were evaluated by flow citometry as the expression of CD28⁺ and CTLA-4⁺ (in T CD4⁺ and CD8⁺ lymphocytes), and CD80⁺, CD86⁺ and HLA-DR⁺ (in CD14⁺ monocytes). Related to cytokine production, results showed that the venom diminished their expression in all conditions tested, compared to the controls. However, the treatment with the venom induced a raise in the expression of CD28⁺ in TCD4⁺ limphocytes; and in CD14⁺ monocytes, aμgmentation of the expression of CD80⁺ and HLA-DR⁺, demonstrating that the venom induces activation of those cells. On the other hand, the venom induced a raise of the expression of CTLA-4⁺ in TCD4⁺ and TCD8⁺ lymphocytes, indicating that it can control the exacerbate activation of those cells.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em Medicina TropicalUFPEBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessTrypanosoma cruziVenenoCitocinasImunidade celularInvestigação da resposta imune induzida por veneno de Bothrops erythromelas em cultura de células mononucleares infectadas com Trypanosoma cruziinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesismestradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPETHUMBNAILDISSERTAÇÃO Kamila Kássia dos Santos Oliveira.pdf.jpgDISSERTAÇÃO Kamila Kássia dos Santos Oliveira.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1187https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/30971/7/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Kamila%20K%c3%a1ssia%20dos%20Santos%20Oliveira.pdf.jpg357ab6b3abb8d02bef4391789ff119d1MD57CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; 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